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| 產(chǎn)地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號 | SEKM-0022 |
| 用途 | |
| 檢測方法 | 雙抗體夾心法 |
| CAS編號 | |
| 檢測限 | |
| 數(shù)量 | 10 |
| 包裝規(guī)格 | |
| 標(biāo)記物 | L-21 |
| 純度 | % |
| 樣本 | 血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液等樣本 |
| 應(yīng)用 | Elisa實驗 |
小鼠白細(xì)胞介素-21ELISA 試劑盒
產(chǎn)品編號#：SEKM-0022
適用于小鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液等樣本
背景介紹：
白介素 21 是最近命名的 I 型細(xì)胞因子，由活化的 CD4+ T 細(xì)胞合成，與 IL-2、IL-4、和IL-15 高度同源，通過 IL-21R 介導(dǎo)多種生物學(xué)效應(yīng)。IL-21 在特定的刺激物存在時，可促進 B、T 細(xì)胞增殖，促進骨髓祖細(xì)胞轉(zhuǎn)化為 NK 細(xì)胞，并使其細(xì)胞毒性增加。IL-21 可促進 NK 細(xì)胞分化并表達 CD16 分子，IL-21 可增強抗原特異性 T 細(xì)胞的細(xì)胞毒活性，增強抗 CD3 抗體活化的 T 細(xì)胞的抗腫瘤作用。Th2 細(xì)胞分泌的 IL-21 可抑制 Th1 細(xì)胞合成 IFN-γ ,從而調(diào)節(jié)Th1 和 Th2 細(xì)胞平衡。小鼠 IL-21 的基因定位于 3 號染色體。小鼠 IL-21 的 cDNA 編碼 146aa多肽前體，去除 24aa 的信號肽，形成 122aa 成熟肽，與人 IL-21 有 57%同源性，兩者編碼的 a 螺旋 A、D 區(qū)域高度保守，該區(qū)域在與其他因子受體相互作用中發(fā)揮重要作用。
檢測原理：
Solarbio (Solarbio ®)ELISA 試劑盒采用基于雙抗體夾心法的酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)。將抗小鼠 IL-21 單克隆抗體包被在酶標(biāo)板上；分別加入梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品和預(yù)稀釋的樣本，標(biāo)準(zhǔn)品和樣本中的小鼠 IL-21 會與酶標(biāo)板上的包被抗體充分結(jié)合；洗板后加入生物素化抗小鼠 IL-21抗體，該抗體會與板子上包被抗體捕獲的標(biāo)準(zhǔn)品和樣本中的小鼠 IL-21 發(fā)生特異性結(jié)合；洗板后加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的鏈霉親和素，生物素與鏈霉親和素會發(fā)生高強度的非共價結(jié)合；洗板后加入顯色劑底物 TMB，若反應(yīng)孔中樣品存在不同濃度的小鼠 IL-21，則HRP 會使無色 TMB 變成不同深淺（正相關(guān)）的藍色物質(zhì)，加入終止液后反應(yīng)孔會變成黃色；*，在 λmax=450nm（OD=450 nm）處測定反應(yīng)孔樣品吸光度（OD），樣本中的小鼠 IL-21濃度與 OD 成正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線和四參數(shù)擬合軟件便可計算出樣本中小鼠 IL-21 的濃度。
注意事項：※※※
1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用，請不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時應(yīng)保存在 2-8℃冰箱，已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品，請丟棄。
3. 試劑盒使用前請在室溫恢復(fù) 30min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測，且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染，請在試驗中使用 1 次性試管，槍頭，封板膜（※）及潔凈塑料容器。.
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少，在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上，使用前請離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時，請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確，每次檢測均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
安全提示：試劑盒中的終止液為酸性溶液，操作人員在使用時請帶上手套并注意防護；在操作過程中也要避免試劑接觸皮膚和眼睛，如果不慎接觸，請用大量清水清洗；檢測血液樣本及其它體液樣本時，請按國家生物實驗室安全防護有關(guān)管理規(guī)定執(zhí)行。
自備實驗器材（不提供，可代購）
1． 酶標(biāo)儀（主波長 450nm，參考波長 630nm）
2． 高精度移液器及一次性吸頭：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
3． 洗板機或洗瓶
4． 37℃孵育箱
5． 雙蒸水，去離子水，量筒等
6． 稀釋用聚丙烯試管
樣本收集及儲存：
1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：
將細(xì)胞培養(yǎng)基移至無菌離心管，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝
于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存），避免反復(fù)凍融。
2. 血清樣本：
室溫血液自然凝固 20 min 后，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min，然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存），保存過程中如有沉淀，請再次離心，避免反復(fù)凍融。
3. 血漿樣本：
將全血收集到含抗血凝劑的管中，根據(jù)標(biāo)本的實際要求選擇 EDTA，檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合 20 min，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min，然后將上清等量分裝于小EP 管并于-20℃下保存（24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存），避免反復(fù)凍融。
※注意：血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本，以免影響檢測結(jié)果；如果樣本中的靶標(biāo)物檢測濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品的*值，請將樣品做適當(dāng)倍數(shù)稀釋后檢測，建議正式實驗前做預(yù)實驗以確定稀釋倍數(shù)。
