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| 產(chǎn)地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號(hào) | SEKR-0032 |
| 用途 | |
| 檢測(cè)方法 | 雙抗體夾心法 |
| CAS編號(hào) | |
| 檢測(cè)限 | |
| 數(shù)量 | 10 |
| 包裝規(guī)格 | |
| 標(biāo)記物 | VEGF |
| 純度 | % |
| 樣本 | 血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液等樣本 |
| 應(yīng)用 | Elisa實(shí)驗(yàn) |
大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子 ELISA 試劑盒
產(chǎn)品編號(hào)：SEKR0032
適用于大鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液等樣本
背景介紹：
血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)或血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF-A)，又稱血管通透性因子(VPF)，是胎兒和成人血管生成和血管生成的有力介質(zhì)，是 PDGF 家族的成員，其特征是在一個(gè)胱氨酸結(jié)構(gòu)中存在 8 個(gè)保守的半胱氨酸殘基，并形成反平行的二硫鍵二聚體(4)。在大鼠和小鼠中發(fā)現(xiàn)了 120、164 和 188 種氨基酸的交替剪接異構(gòu)體，而在人類中已發(fā)現(xiàn) 121、145、165、183、189和 206 氨基酸亞型。在人類中，VEGF 165 似乎是最豐富和最有力的異構(gòu)體，其次是 VEGF 121 和 VEGF 189。同樣的模式可能存在于大鼠和小鼠。除 VEGF 120 和 VEGF 121 外，其他亞型都含有基本的肝素結(jié)合區(qū)，不能自由擴(kuò)散。大鼠 VEGF 164 與小鼠相應(yīng)區(qū)域的氨基酸序列同源性為 97%，與人和牛的同源性為 88%，與豬和犬的同源性為 89%，與貓和馬的同源性為90%。VEGF 在骨骼肌和心肌、肝細(xì)胞、成骨細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞、棕色脂肪組織、CD 34 干細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和血管平滑肌等多種細(xì)胞和組織中均有表達(dá)。缺氧和細(xì)胞因子 IL-1、IL-6、IL-8、癌胚素 M、腫瘤壞死因子-Α 均可誘導(dǎo) VEGF 的表達(dá)，在發(fā)育過程中和成體均有不同程度的表達(dá)。
檢測(cè)原理：
Solarbio (Solarbio ®)ELISA 試劑盒采用基于雙抗體夾心法的酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)技術(shù)。將抗大鼠 VEGF 單克隆抗體包被在酶標(biāo)板上；分別加入梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品和預(yù)稀釋的樣本，標(biāo)準(zhǔn)品和樣本中的大鼠 VEGF 會(huì)與酶標(biāo)板上的包被抗體充分結(jié)合；洗板后加入生物素化抗大鼠 VEGF 抗體，該抗體會(huì)與板子上包被抗體捕獲的標(biāo)準(zhǔn)品和樣本中的大鼠 VEGF 發(fā)生特異性結(jié)合；洗板后加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的鏈霉親和素，生物素與鏈霉親和素會(huì)發(fā)生高強(qiáng)度的非共價(jià)結(jié)合；洗板后加入顯色劑底物 TMB，若反應(yīng)孔中樣品存在不同濃度的大鼠 VEGF，則 HRP 會(huì)使無色 TMB 變成不同深淺（正相關(guān)）的藍(lán)色物質(zhì)，加入終止液后反應(yīng)孔會(huì)變成黃色；*，在 λmax=450 nm（OD=450 nm）處測(cè)定反應(yīng)孔樣品吸光度（OD），樣本中的大鼠 VEGF濃度與 OD 成正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線和四參數(shù)擬合軟件便可計(jì)算出樣本中大鼠 VEGF 的濃度。
注意事項(xiàng)：
1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用，請(qǐng)不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時(shí)應(yīng)保存在 2-8℃冰箱，已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品，請(qǐng)丟棄。
3. 試劑盒使用前請(qǐng)?jiān)谑覝鼗謴?fù) 30 min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測(cè)，且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染，請(qǐng)?jiān)谠囼?yàn)中使用 1 次性試管，槍頭，封板膜（※）及潔凈塑料容器。.
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少，在運(yùn)輸過程中微量液體會(huì)沾到管壁及瓶蓋上，使用前請(qǐng)離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時(shí)，請(qǐng)用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請(qǐng)不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個(gè)組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確，每次檢測(cè)均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
安全提示：
試劑盒中的終止液為酸性溶液，操作人員在使用時(shí)請(qǐng)帶上手套并注意防護(hù)；在操作過程中也要避免試劑接觸皮膚和眼睛，如果不慎接觸，請(qǐng)用大量清水清洗；檢測(cè)血液樣本及其它體液樣本時(shí)，請(qǐng)按國(guó)家生物實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)有關(guān)管理規(guī)定執(zhí)行。
自備實(shí)驗(yàn)器材（不提供，可代購(gòu)）
1． 酶標(biāo)儀（主波長(zhǎng) 450nm，參考波長(zhǎng) 630nm）
2． 高精度移液器及一次性吸頭：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
3． 洗板機(jī)或洗瓶
4． 37℃孵育箱
5． 雙蒸水，去離子水，量筒等
6． 稀釋用聚丙烯試管
樣本收集及儲(chǔ)存：
1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：
將細(xì)胞培養(yǎng)基移至無菌離心管，在 4℃條件下 1000 ×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小時(shí)內(nèi)檢測(cè)可放入 2-8℃儲(chǔ)存），避免反復(fù)凍融。
2. 血清樣本：
室溫血液自然凝固 20 min 后，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min，然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小時(shí)內(nèi)檢測(cè)可放入 2-8℃儲(chǔ)存），保存過程中如有沉淀，請(qǐng)?jiān)俅坞x心，避免反復(fù)凍融。
3. 血漿樣本：
將全血收集到含抗血凝劑的管中，根據(jù)標(biāo)本的實(shí)際要求選擇 EDTA，檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合 20 min，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min，然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存（24小時(shí)內(nèi)檢測(cè)可放入 2-8℃儲(chǔ)存），避免反復(fù)凍融。
※注意：血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本，以免影響檢測(cè)結(jié)果；如果樣本中的靶標(biāo)物檢測(cè)濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品的*值，請(qǐng)將樣品做適當(dāng)倍數(shù)稀釋后檢測(cè)，建議正式實(shí)驗(yàn)前做預(yù)實(shí)驗(yàn)以確定稀釋倍數(shù)。
