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北京索萊寶科技有限公司
產(chǎn)品展廳
小鼠骨形態(tài)發(fā)生蛋白9Elisa試劑盒 Mouse BMP-9 Elisa kit
  • 品牌:Solarbio
  • 產(chǎn)地:北京
  • 貨號(hào):SEKM-0056
  • 發(fā)布日期: 2019-04-26
  • 更新日期: 2025-07-11
產(chǎn)品詳請(qǐng)
產(chǎn)地 北京
品牌 Solarbio
貨號(hào) SEKM-0056
檢測限 8 pg/ml
數(shù)量 10
檢測方法 雙抗體夾心法
標(biāo)記物 BMP-9
樣本 Serum, plasma, Cell culture supernatant
應(yīng)用 Sandwich ELISA

小鼠骨形態(tài)發(fā)生蛋白9ELISA 試劑盒

 

產(chǎn)品編號(hào):SEKM-0056

 

適用于小鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液等樣本

 

 

 

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背景介紹:
     骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)構(gòu)成轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)超家族的一個(gè)亞群。顧名思義,骨形成蛋白最 初被確定為軟骨和骨形成的調(diào)節(jié)器。它們?cè)诟鞣N組織和器官的胚胎發(fā)生和形態(tài)發(fā)生過程中起著重要作用, 并且可以調(diào)節(jié)多種細(xì)胞類型的生長、分化、趨化和凋亡。

     骨形成蛋白-9(bone morphogenetic protein-9,BMP-9)又名生長分化因子-2(growth differentiation factor 2,GDF-2),是骨形成蛋白家族(BMPs)的主要成員之一,是由 429 個(gè)氨基酸組成的前體蛋白,通過絲氨酸 蛋白酶的內(nèi)切作用,得到成熟有活性的短二聚體(25 k Da)。BMP-9 由非實(shí)質(zhì)性肝細(xì)胞(肝星狀細(xì)胞、庫普 弗細(xì)胞等)分泌,其與活化素受體樣激酶-1 及非實(shí)質(zhì)肝細(xì)胞內(nèi)的內(nèi)皮糖蛋白具有較高的親和力。BMP-9 主 要在*中高表達(dá),同時(shí)也在大腦、肺、骨骼肌等組織中有少量的表達(dá)。多項(xiàng)研究表明,BMP-9 具有促進(jìn) 造血、成骨、成軟骨及誘導(dǎo)肝細(xì)胞增殖的作用,同時(shí)還有調(diào)節(jié)血糖穩(wěn)態(tài)以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)膽堿能神經(jīng)元分化等功能。

 

檢測原理:
      Solarbio ELISA 試劑盒采用基于雙抗體夾心法的酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)。將抗小鼠 BMP-9 單克隆抗體包被在酶標(biāo)板上;分別加入梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品和預(yù)稀釋的樣本,標(biāo)準(zhǔn)品和樣本中的小鼠 BMP-9 會(huì) 與酶標(biāo)板上的包被抗體充分結(jié)合;洗板后加入生物素化抗小鼠 BMP-9 抗體,該抗體會(huì)與板子上包被抗體捕獲 的標(biāo)準(zhǔn)品和樣本中的小鼠 BMP-9 發(fā)生特異性結(jié)合;洗板后加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的鏈霉親和素, 生物素與鏈霉親和素會(huì)發(fā)生高強(qiáng)度的非共價(jià)結(jié)合;洗板后加入顯色劑底物 TMB,若反應(yīng)孔中樣品存在不同濃 度的小鼠 BMP-9,則 HRP 會(huì)使無色 TMB 變成不同深淺(正相關(guān))的藍(lán)色物質(zhì),加入終止液后反應(yīng)孔會(huì)變成黃 色;*,在λmax=450 nm(OD=450 nm)處測定反應(yīng)孔樣品吸光度(OD),樣本中的小鼠濃度與 OD 成正比, 通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線和四參數(shù)擬合軟件便可計(jì)算出樣本中小鼠的濃度。

 

原理圖:

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注意事項(xiàng):
1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用,請(qǐng)不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時(shí)應(yīng)保存在 2-8℃冰箱,已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品,請(qǐng)丟棄。
3. 試劑盒使用前請(qǐng)?jiān)谑覝鼗謴?fù) 30 min,且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測,且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染,請(qǐng)?jiān)谠囼?yàn)中使用 1 次性試管,槍頭,封板膜(※)及潔凈塑料容器。

6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少,在運(yùn)輸過程中微量液體會(huì)沾到管壁及瓶蓋上,使用前請(qǐng)離心處理(5-10 S 即可),使管壁上的液體集中在管底部,取用時(shí),請(qǐng)用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外,請(qǐng)不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個(gè)組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確,每次檢測均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

 

安全提示:
試劑盒中的終止液為酸性溶液,操作人員在使用時(shí)請(qǐng)帶上手套并注意防護(hù);在操作過程中也要避免試
劑接觸皮膚和眼睛,如果不慎接觸,請(qǐng)用大量清水清洗;檢測血液樣本及其它體液樣本時(shí),請(qǐng)按國家生物
實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)有關(guān)管理規(guī)定執(zhí)行。

 

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自備實(shí)驗(yàn)器材(不提供,可代購)
1. 酶標(biāo)儀(主波長 450nm,參考波長 630nm)
2. 高精度移液器及一次性吸頭:0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
3. 洗板機(jī)或洗瓶
4. 37℃孵育箱
5. 雙蒸水,去離子水,量筒等
6. 稀釋用聚丙烯試管

 


樣本收集及儲(chǔ)存:
1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:
將細(xì)胞培養(yǎng)基移至無菌離心管,在 4℃條件下 1000 ×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管于-20℃下保存(24 小時(shí)內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲(chǔ)存),避免反復(fù)凍融。
2. 血清樣本:
室溫血液自然凝固 20 min 后,在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于
-20℃下保存(24 小時(shí)內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲(chǔ)存),保存過程中如有沉淀,請(qǐng)?jiān)俅坞x心,避免反復(fù)凍融。
3. 血漿樣本:
將全血收集到含抗血凝劑的管中,根據(jù)標(biāo)本的實(shí)際要求選擇 EDTA,檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合 20 min ,在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存(24小時(shí)內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲(chǔ)存),避免反復(fù)凍融。
※注意:血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本,以免影響檢測結(jié)果;如果樣本中的靶標(biāo)物檢測濃度高
于標(biāo)準(zhǔn)品的*值,請(qǐng)將樣品做適當(dāng)倍數(shù)稀釋后檢測,建議正式實(shí)驗(yàn)前做預(yù)實(shí)驗(yàn)以確定稀釋倍數(shù)。

 

 

試劑準(zhǔn)備:
1. 試劑回溫:首先在實(shí)驗(yàn)前 30 min 將試劑盒,待測樣本放置于室溫下,濃縮洗滌液如出現(xiàn)結(jié)晶,請(qǐng)放入
37℃溫浴直到結(jié)晶全部溶解。
2. 配制洗滌液:預(yù)先計(jì)算好稀釋后的洗滌液使用體積,然后用雙蒸水或去離子水將 20 倍濃縮洗滌液稀釋成 1 倍應(yīng)用液,未用完的濃縮洗滌液放入 4℃冰箱保存。
3. 標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋:加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣本稀釋液(SR1)1000ul 至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中,靜置15分鐘待其完全溶解后 輕輕混勻(濃度為2000pg/ml),按照以下濃度進(jìn)行2倍稀釋:500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125pg/ml 進(jìn)行稀釋。500pg/ml作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的*點(diǎn)濃度,標(biāo)準(zhǔn)品/樣本稀釋液(SR1)作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的零點(diǎn) (0pg/ml)。復(fù)溶過的標(biāo)準(zhǔn)品原液(2000pg/ml)未用完的應(yīng)廢棄或根據(jù)需要按照一次用量分裝,并將其 貯存在-20~-80℃冰箱,具體如下圖。

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4. 生物素化抗體工作液:預(yù)先計(jì)算好試驗(yàn)所需用量,用檢測稀釋液(SR2)將100倍抗體濃縮液稀釋成1倍

應(yīng)用工作液(稀釋前充分混勻),請(qǐng)?jiān)?0分鐘內(nèi)加入到反應(yīng)孔中。

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5. 酶結(jié)合物工作液:按每次試驗(yàn)所需用量配制,用酶結(jié)合物稀釋液(SR3)將100倍濃縮酶結(jié)合物稀釋成1 倍應(yīng)用工作液(稀釋前離心),請(qǐng)?jiān)?0分鐘內(nèi)使用。

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6. 洗滌方法: 

自動(dòng)洗板:甩盡酶標(biāo)板孔中液體,在厚迭吸水紙上拍干,注入洗滌液為 300ul/孔,注 與吸出間隔為 30 秒,洗板 5 次。 

手工洗板:甩盡酶標(biāo)板孔中液體,在厚迭吸水紙上拍干,用洗瓶加入洗滌液 300ul/孔,靜止 30 秒后甩 凈酶標(biāo)板孔中液體,在厚迭的吸水紙上拍干,洗板 5 次。

 

結(jié)果判斷:

1.用酶標(biāo)儀 450 nm 波長測定 OD 值。選擇雙波長檢測,參考波長為 630 nm。如不能進(jìn)行雙波長檢測,請(qǐng) 用 450 nm 的 OD 測定值減去 630 nm 的 OD 測定值。

2.計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品、樣品的平均 OD 值:每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的 OD 值應(yīng)減去零孔的 OD 值

3.以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),吸光度OD值為縱坐標(biāo),用軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,樣品中BMP-9含量可通過對(duì)應(yīng)OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

4.若標(biāo)本 OD 值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限,應(yīng)做適當(dāng)稀釋后重新檢測,計(jì)算濃度時(shí)再乘以稀釋倍數(shù)。

 

參數(shù)表征:

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1. 數(shù)據(jù)及標(biāo)準(zhǔn)曲線

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本圖僅供參考,應(yīng)以當(dāng)次試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算小鼠 BMP-9 的樣本含量


2. 靈敏度:
*可檢測小鼠 BMP-9 濃度達(dá) 4pg/ml,
20 個(gè)零標(biāo)準(zhǔn)品濃度 OD 的平均值加上兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差,計(jì)算相應(yīng)的可檢測濃度。


3. 特異性:
不與人的 BMP-2、 BMP-3、 BMP-3b、 BMP-4 、BMP-5 、BMP-6 、BMP-8b、TGF-α、TGF-β1 小鼠 的 BMP-3b、BMPR-1A、BMPR-1B 等反應(yīng)。


4. 重復(fù)性:
板內(nèi),板間變異系數(shù)<10%。


5. 回收率:
在選取的健康小鼠血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清中加入 3 個(gè)不同濃度水平的小鼠 BMP-9,計(jì)算回收率。

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6. 線性稀釋:

分別在選取的 4 份健康小鼠血漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清中加入高濃度小鼠 BMP-9,在標(biāo)準(zhǔn)曲線動(dòng)力學(xué)范圍內(nèi)進(jìn)行稀 釋,評(píng)估線性。

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詳情請(qǐng)咨詢:010-56341250

 

 


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