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產(chǎn)地 | 北京 |
品牌 | Solarbio |
貨號(hào) | BC2115 |
保存條件 | 2-8℃保存 |
英文名稱(chēng) | Vitamin B6 (VB6) content detection kit |
CAS編號(hào) | |
保質(zhì)期 | 1年 |
維生素 B6 檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法
注意:正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
英文名稱(chēng):Vitamin B6 (VB6) content detection kit
關(guān)鍵詞:維生素B6|維生素B6檢測(cè)|維生素B6含量檢測(cè)
貨號(hào):BC2115
規(guī)格:100T/48S
產(chǎn)品內(nèi)容:
提取液:液體 35mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 50mL×1 瓶,4℃保存。
試劑二:液體 6mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:液體 10mL×1 瓶,4℃避光保存。
試劑四:粉劑×1 瓶,4℃避光保存,臨用前加入 10mL 蒸餾水混勻,如果一次性用不完,可分 裝于-20℃保存待用。
標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑×1 支,10mg 維生素 B6,4℃保存。臨用前加入 1mL 試劑一,配成 10mg/mL(即 10000μg/mL)的標(biāo)準(zhǔn)液。
產(chǎn)品說(shuō)明:
維生素 B6(Vitamin B6)又稱(chēng)吡哆素,其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺,在體內(nèi)以磷酸酯的形 式存在,是一種水溶性維生素,肉類(lèi)、全谷類(lèi)、蔬菜和堅(jiān)果類(lèi)中含量較高。在機(jī)體中參與多種蛋白 質(zhì)和氨基酸的代謝,對(duì)生物體具有極其重要的作用。 VB6 與 4-氨基安替比林在強(qiáng)氧化劑作用下生成穩(wěn)定的黃色化合物,在 400nm 有特征吸收峰。
試驗(yàn)中所需的儀器和試劑:
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、微量玻璃比色皿/96 孔板、可調(diào)式移液槍、研 缽/勻漿器、EP 管、冰和蒸餾水。
操作步驟:
粗酶液提?。?/span>
組織:將樣品磨碎,按照質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱(chēng)取約 0.1g,加 入 0.6mL 提取液)加入提取液,60℃浸提 30min,加蒸餾水 0.4mL,混勻后于 25℃,16000rpm 離心 10min,取上清測(cè)定(動(dòng)物組織及其他蛋白含量較高的樣本建議離心 20-30 分鐘或反復(fù)離心 2-3 次至 上清無(wú)混濁)。
細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加 入 0.6mL 提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時(shí)間 3min);加蒸 餾水 0.4mL,混勻后于 25℃,16000rpm 離心 10min,取上清測(cè)定。 液體:直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟:
分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 400nm,蒸餾水調(diào)零。
將 10mg/mL(10000μg/mL)標(biāo)準(zhǔn)液用試劑一稀釋為 500、250、125、62.5、31.25、15.625 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
操作表:
在 1.5ml 離心管或 96 孔板中依次加入下列試劑
樣品對(duì)照管 樣品測(cè)定管 標(biāo)準(zhǔn)管 空白管 空白對(duì)照管
樣品(μL) 40 40 - - -
試劑一(μL) - - - 40 40
標(biāo)準(zhǔn)溶液 (μg/mL) - - 40 - -
試劑二(μL) 40 40 40 40 40
試劑三(μL) 60 60 60 60 60
試劑四(μL) - 60 60 60 -
蒸餾水(μL) 60 - - - 60
充分混勻,25℃反應(yīng) 20min,測(cè)定 400nm 處吸光值,記為 A 樣品測(cè)定管和 A 樣品對(duì)照管、 A 空白管、A 空白對(duì)照管,△A=(A 樣本測(cè)定管-A 樣本對(duì)照管) (A 空白管- A 空白對(duì)照管)。 空白管、空白對(duì)照管只要做一管。
維生素 B6 含量計(jì)算:
標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制: 以各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為 x 軸,其對(duì)應(yīng)的△A 標(biāo)準(zhǔn)為 y 軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到標(biāo)準(zhǔn)方程 y=kx+b, 將△A 帶入方程得到 x(μg/mL)
維生素 B6 含量的計(jì)算:
按蛋白濃度計(jì)算 VB6(μg/mg prot)= x×V 提取÷(V 提取×Crp)= x÷Cpr
按樣本質(zhì)量計(jì)算 VB6(μg/g 鮮重)= x×V 提取÷W=x÷W
按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算 VB6(μg/104 cell)= x×V 提取÷細(xì)胞數(shù)量(萬(wàn)個(gè))=x÷細(xì)胞數(shù)量(萬(wàn)個(gè))
按液體體積計(jì)算 VB6(μg/mL)= x×V 提取÷V 提取= x
V 提?。禾崛∫后w積,1mL;
V 樣:加入的樣品體積,0.04mL;
Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;
W:樣本質(zhì)量,g。
注意事項(xiàng):
A 大于 1.2 時(shí),建議將樣品用試劑一稀釋后再進(jìn)行測(cè)定,并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
蛋白濃度較高的樣品,比如動(dòng)物組織、豆類(lèi)種子等,若顯色完成后有沉淀產(chǎn)生,將樣本稀釋后 再測(cè)定,在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
3、 顯色完成后立即進(jìn)行測(cè)定,盡量保證反應(yīng)時(shí)間一致。