維生素E(VE)含量檢測試劑盒 可見分光光度法
- 發(fā)布日期: 2019-05-24
- 更新日期: 2025-07-09
產(chǎn)品詳請
產(chǎn)地 |
北京
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品牌 |
Solarbio
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貨號 |
BC1420
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保存條件 |
2-8℃保存
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英文名稱 |
Vitamin E (VE) content test kit
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CAS編號 |
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保質(zhì)期 |
1年
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維生素 E(VE)含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意:正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
英文名稱:Vitamin E (VE) content test kit
關(guān)鍵詞:維生素E|維生素E檢測|VE|VE檢測
貨號:BC1420
規(guī)格:50T/24S
產(chǎn)品內(nèi)容:
提取液:液體 90mL 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 7mL×1 瓶,4℃避光保存;
試劑二:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑三:無水乙醇 5mL×1 瓶,自備,RT 保存;
試劑四:液體 20mL×1 瓶,4℃保存;
標(biāo)準(zhǔn)品:液體 20mg×1 支,-20℃避光保存。臨用前加入 1 mL 無水乙醇,配成 20mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
產(chǎn)品說明:
維生素 E(Vitamin E)是一種天然脂溶性抗氧化劑,是最主要的抗氧化劑之一。能阻斷機(jī)體不飽和脂肪酸的過氧化,維持不飽和脂肪酸細(xì)胞膜的完整性和正常功能,并可清除超氧陰離子自由基,具有延緩衰老、預(yù)防溶血性貧血等作用。
VE 還原 Fe3+為 Fe2+,Fe2+與 1,10-菲羅啉產(chǎn)生有色絡(luò)合物,在 530nm 有特征吸收峰。
試驗中所需的儀器和試劑:
可見分光光度計、天平、臺式離心機(jī)、1mL 玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、漩渦震蕩儀、無水乙醇、EP 管。
操作步驟:
一、維生素 E 的提?。?/span>
組織:按照質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.3g,加入 1.5mL 提取液)加入提取液,勻漿后用提取液定至 3mL,在漩渦混勻儀上震蕩 5min(充分抽提),于 25℃,5000g離心 5-10min,取上層測定。
細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104 個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 1500 萬細(xì)胞加入 3mL 提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時間 3min)后在漩渦混勻儀上震蕩 5min(充分抽提),于 25℃,5000g 離心 5-10min,取上層測定。
血清或其他液體:取 0.3mL,用提取液定至 3mL,漩渦儀混勻上震蕩 5min(充分抽提),于 25℃,5000g 離心 5-10min,取上層測定。
二、測定步驟:
1、 分光光度計預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 530nm,無水乙醇調(diào)零。
2、 將 20mg/mL 標(biāo)準(zhǔn)液用無水乙醇稀釋為 0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.008、0.004mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
3、 操作表:(在 1.5ml 離心管中依次加入下列試劑)
對照管 測定管 標(biāo)準(zhǔn)管 空白管
樣品(μL) 500 500 - -
標(biāo)準(zhǔn)溶液(μL) - - 500 -
無水乙醇(μL) - - - 500
試劑一(μL) 100 100 100 100
試劑二(μL) - 100 100 100
試劑三(μL) 100 - - -
充分混勻,立即記時,25℃反應(yīng) 5min
試劑四(μL) 300 300 300 300
充分混勻,測定 530nm 處吸光值,記為 A 對照管、A 測定管、A 標(biāo)準(zhǔn)管和 A 空白管。計算△A=A測定管-A 對照管,△A 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管。每個測定管需設(shè)一個對照管。
三、維生素 E 含量計算:
1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:
以各個標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為 x 軸,其對應(yīng)的△A 標(biāo)準(zhǔn)為 y 軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到標(biāo)準(zhǔn)方程 y=kx+b,將△A 帶入方程得到 x(μg/mL)
2、 維生素 E 含量的計算:
(1)按蛋白濃度計算
VE 含量(μg /mg prot)=x×V 樣÷(V 樣×Cpr)=x÷Cpr。
(2)按樣本質(zhì)量計算
VE 含量(μg /g 鮮重)=x×V 樣÷(V 樣×W÷V 樣總)=3 x÷W。
(3)按照細(xì)胞數(shù)量計算
VE 含量(μg /104cell)=x×V 樣÷(V 樣×細(xì)胞數(shù)量(萬個)÷V 樣總)=3x÷細(xì)胞數(shù)量(萬個)。
(4)按液體體積計算
VE 含量(μg /mL)= x×V 樣總÷V 液體=10x。
V 樣:加入樣本體積,0.5mL;
V 樣總:加入提取液體積,3mL;
Cpr:蛋白濃度,mg/mL;
W:樣本質(zhì)量,g;
V 液體:血清或其他液體體積,0.3mL。
注意事項:
1、 如果樣品在離心后吸取的上層液體不足 1 mL,建議用無水乙醇進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂?,并在計算公式中乘以稀釋倍?shù)。
2、 若反應(yīng)體系產(chǎn)生沉淀,需要將樣品用無水乙醇進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂?,并在計算公式中乘以稀釋倍?shù)。
3、 比色皿需用無水乙醇沖洗,勿用蒸餾水以防出現(xiàn)分層影響試驗數(shù)據(jù)。
4、 當(dāng)△A 大于 1 時,建議將樣本用無水乙醇稀釋后再進(jìn)行測定。