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維生素 E（VE）含量檢測試劑盒說明書
微量法
注意：正式測定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
英文名稱：Vitamin E (VE) content test kit
關(guān)鍵詞：維生素E|維生素E檢測|VE|VE檢測
貨號：BC1425
規(guī)格：100T/48S

產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 3mL×1 瓶， 4℃避光保存；
試劑二：液體 2mL×1 瓶，4℃保存；
試劑三：無水乙醇 2mL×1 瓶，自備，RT 保存；
試劑四：液體 7mL×1 瓶，4℃保存；
標(biāo)準(zhǔn)品：液體 20mg×1 支，-20℃避光保存。臨用前加入 1 mL 無水乙醇，配成 20mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

產(chǎn)品說明：
維生素 E（Vitamin E）是一種天然脂溶性抗氧化劑，是最主要的抗氧化劑之一。能阻斷機(jī)體不飽和脂肪酸的過氧化，維持不飽和脂肪酸細(xì)胞膜的完整性和正常功能，并可清除超氧陰離子自由基，具有延緩衰老、預(yù)防溶血性貧血等作用。
VE 還原 Fe3+為 Fe2+，Fe2+與 1,10-菲羅啉產(chǎn)生有色絡(luò)合物，在 530nm 有特征吸收峰。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、天平、臺式離心機(jī)、微量玻璃比色皿/96 孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、漩渦震蕩儀、無水乙醇、EP 管。

操作步驟：
一、維生素 E 的提?。?/span>
組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 1mL 提取液）加入提取液，勻漿后用提取液定至 1mL，定至在漩渦混勻儀上震蕩 5min（充分抽提），于 25℃，5000g離心 5-10min，取上層測定。
細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）后在漩渦混勻儀上震蕩 5min（充分抽提），于 25℃，5000g 離心 5-10min，取上層測定。
血清或其他液體：取 0.1mL，加 0.9mL 提取液，漩渦儀混勻上震蕩 5min（充分抽提），于 25℃，5000g 離心 5-10min，取上層測定。

二、測定步驟：
1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 530nm，無水乙醇調(diào)零。
2、 將 20mg/mL 標(biāo)準(zhǔn)液用無水乙醇稀釋為 0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.008、0.004μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
3、 操作表：(在 1.5ml 離心管或 96 孔板中依次加入下列試劑)
對照管 測定管 標(biāo)準(zhǔn)管 空白管
樣品（μL）      100    100    -      -
標(biāo)準(zhǔn)溶液（μL）   -      -     100     -
無水乙醇（μL）   -      -      -     100
試劑一（μL）    20     20     20     20
試劑二（μL）    -       20     20    20
試劑三（μL）    20      -       -     -
充分混勻，立即記時(shí)，25℃反應(yīng) 5min
試劑四（μL）    60     60      60    60
充分混勻，將液體置于微量玻璃比色皿/96 孔板中，測定 530nm 處吸光值，記為 A 對照管、A測定管、A 標(biāo)準(zhǔn)管和 A 空白管，△A=A 測定管-A 對照管。計(jì)算△A=A 測定管-A 對照管，△A 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管。每個(gè)測定管需設(shè)一個(gè)對照管。

三、維生素 E 含量計(jì)算：
1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：
以各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為 x 軸，其對應(yīng)的△A 標(biāo)準(zhǔn)為 y 軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程 y=kx+b，將△A 帶入方程得到 x（μg/mL）
2、 維生素 E 含量的計(jì)算：
（1）按蛋白濃度計(jì)算
VE 含量（μg /mg prot）=x×V 樣÷（V 樣×Cpr）=x÷Cpr。
（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算
VE 含量（μg /g 鮮重）=x×V 樣÷（V 樣×W÷V 樣總）=x÷W。
（3）按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
VE 含量（μg /104
cell）=x×V 樣÷（V 樣×細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)）÷V 樣總）=x÷細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)）。
（4）按液體體積計(jì)算
VE 含量（μg /mL）= x×V 樣總÷V 液體=10x。

V 樣：加入樣本體積，0.01mL；
V 樣總：加入提取液體積，1mL；
Cpr：蛋白濃度，mg/mL；
W：樣本質(zhì)量，g；
V 液體：血清或其他液體體積，0.1mL。

注意事項(xiàng)：
1、 若反應(yīng)體系產(chǎn)生沉淀，需要將樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂?，并在?jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
2、 若用微量玻璃比色皿檢測，比色皿時(shí)需用無水乙醇沖洗，勿用蒸餾水以防出現(xiàn)分層影響試驗(yàn)數(shù)據(jù)。
3、 當(dāng)△A 大于 0.7 時(shí)，建議將樣本用無水乙醇稀釋后再進(jìn)行測定。