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| 產(chǎn)地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號 | BC1985 |
| 用途 | |
| 英文名稱 | Total cholesterol (TC) content test kit |
| 包裝規(guī)格 | |
| 純度 | % |
| CAS編號 | |
| 保質(zhì)期 | 1年 |
| 是否進(jìn)口 |
試驗中所需的儀器和試劑：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、天平、低溫臺式離心機(jī)、微量玻璃比色皿/96 孔板、可調(diào)式移液槍、EP 管、蒸餾水、異丙醇。
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：異丙醇 100mL×1 瓶，自備，4℃保存；
試劑一：液體 30mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 200μL×1 支，4℃保存；
試劑三：液體 30μL×1 支，4℃保存；
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1支，10mg膽固醇，4℃保存。臨用前加入517μL提取液，振蕩溶解，即為50μmol/mL
的膽固醇標(biāo)準(zhǔn)溶液。
工作液的配制：將試劑一：試劑二：試劑三按比例3mL：20μL：3μL配制工作液，現(xiàn)用現(xiàn)配。
操作步驟：
一、樣本處理：
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿。10000g，4℃離心 10min，取上清置冰上待測。
2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 2 秒，間隔 3 秒，總時間 3min）；然后 10000g，4℃離心 10min，取上清置于冰上待測。
3. 血清（漿）樣品：直接測定。
二、測定步驟：
1、 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 500nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 將 50μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)液用提取液稀釋為 2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078μmol/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
3、 操作表：(在離心管或 96 孔板中依次加入下列試劑)
測定管 標(biāo)準(zhǔn)管 空白管
樣品（μL） 20 - -
標(biāo)準(zhǔn)溶液（μL） - 20 -
提取液（μL） - - 20
工作液（μL） 180 180 180
充分混勻，37℃靜置 15min，反應(yīng)完成后測定 500nm 處吸光值 A，分別記為 A測定管、A 標(biāo)準(zhǔn)管和 A 空白管，△A=A 測定管-A 空白管，△A 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管，
空白管只需測一次。
總膽固醇含量計算
一、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：
以各個標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為 x 軸，其對應(yīng)的△A 標(biāo)準(zhǔn)為 y 軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程 y=kx+b，將△A 帶入方程得到 x（μmol/mL）
二、總膽固醇含量的計算：
1. 血清（漿）中 FC 含量計算：
TC 含量（μmol/dL）=x×100。
2. 組織中 FC 含量計算：
(1) 按樣本蛋白濃度計算
TC 含量（μmol/mg prot）=x×V 提取÷（Cpr×V 提?。?/span>=x÷Cpr。
(2) 按樣本鮮重計算
TC 含量（μmol/g 鮮重）=x×V 提取÷W= x÷W
3. 細(xì)胞、細(xì)菌中 TC 含量計算：
TC 含量(μmol/104cell)=x×V 提取÷500=0.002x。
100：1dL=100mL；
V 提?。杭尤霕颖镜奶崛∫后w積，1mL；
W：樣本質(zhì)量，g；
500:500 萬個細(xì)胞數(shù)量。
注意事項
當(dāng)△A 大于 1.5 時，建議將樣本用提取液稀釋后再進(jìn)行測定。
相關(guān)文獻(xiàn)：
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