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| 產(chǎn)地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號 | BC1030 |
| 保存條件 | 2-8℃保存 |
| 英文名稱 | NAD Kinase (NADK) Assay Kit |
| CAS編號 | |
| 保質(zhì)期 | 1年 |
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣 產(chǎn)品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存； 參考價格：1080
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨
關(guān)鍵字：NAD激酶試劑盒|活性檢測試劑盒|NADK活性檢測|試劑盒
簡要介紹：
NADK（EC 2.7.1.23）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，是目前所發(fā)現(xiàn)的生物體 內(nèi)*能夠催化 NAD+磷酸化生成 NADP+的酶，可催化 NAD（H）以 ATP 或無機多聚lin酸[poly(P)] 作為磷?；w進行磷酸化反應，生成 NADP（H）。因此，NAD 激酶在合成 NADP（H）以及調(diào)節(jié) NAD（H）與 NADP（H）的平衡上具有重要作用。 NADK 催化 NAD+磷酸化生成 NADP+，NADP+可被 6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原為 NADPH；在 340nm 下測定 NADPH 增加速率?？煞磻?NADK 活性的大小。
產(chǎn)品詳細描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 25mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 50mL×1 瓶，4℃保存；
試劑三：粉劑×1 瓶，-20℃保存；
試劑四：粉劑×1 瓶，-20℃保存。
產(chǎn)品說明：
NADK（EC 2.7.1.23）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，是目前所發(fā)現(xiàn)的生物體 內(nèi)*能夠催化 NAD+磷酸化生成 NADP+的酶，可催化 NAD（H）以 ATP 或無機多聚lin酸[poly(P)] 作為磷酰基供體進行磷酸化反應，生成 NADP（H）。因此，NAD 激酶在合成 NADP（H）以及調(diào)節(jié) NAD（H）與 NADP（H）的平衡上具有重要作用。 NADK 催化 NAD+磷酸化生成 NADP+，NADP+可被 6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原為 NADPH；在 340nm 下測定 NADPH 增加速率?？煞磻?NADK 活性的大小。
操作步驟：
粗酶液提?。?/span>
細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液），超聲 波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；8000g 4℃離心 10min， 取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 2、 血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟和加樣表：
分光光度計預熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 340nm，蒸餾水調(diào)零。
將試劑一和試劑二 37℃（哺乳動物）或 25℃（其他物種）水浴 15min 以上。
工作液一的配制：在試劑三中加入 12mL 試劑一，充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保 存，禁止反復凍融。
工作液二的配制：在試劑四中加入 12mL 試劑一，充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
加樣表
| 試劑名稱（μL） | 測定孔 | 對照孔 |
| 樣本 | 100 | 100 |
| 工作液一 | 400 | |
| 試劑一 | 400 | |
| 充分混勻，37℃（哺乳動物）或 25℃（其他物種）水浴 15min，立即煮沸 2min （蓋緊，防止水分散失）冰浴冷卻，10000g，25℃離心 10min，取上清 | ||
| 上清液 | 200 | 200 |
| 工作液二 | 800 | 800 |
加完試劑混勻，室溫靜置 15min，340nm 下測定吸光值，ΔA＝A 測定-A 對照。
NADK 活性計算：
血清（漿）NADK 活性
單位定義：每 mL 血清（漿）每分鐘生成 1nmol 的 NADP 定義為一個酶活力單位。 NADK（nmol/min/mL）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109 ]÷V 樣÷T =53.59×ΔA
組織、細菌或細胞 NADK 活性
按樣本蛋白濃度計算
單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘生成 1nmol 的 NADP 定義為一個酶活力單位。 NADK（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109 ]÷（V 樣×Cpr）÷T =53.59×ΔA÷Cpr
按樣本鮮重計算
單位定義：每 g 組織每分鐘生成 1nmol 的 NADP 定義為一個酶活力單位。
NADK（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109 ]÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T =53.59×ΔA÷W
按細菌或細胞密度計算
單位定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘生成 1nmol 的 NADP 定義為一個酶活力單位。 NADK（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109 ]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T =0.107×ΔA
V 反總：反應體系總體積，5×10-4 L；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色 皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.1 ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應時間，15 min； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500 萬。
