產(chǎn)品名稱：NAD激酶(NADK)活性檢測(cè)試劑盒 微量法

產(chǎn)品英文名： Micro NAD Kinase (NADK) Assay Kit

產(chǎn)品貨號(hào)：BC1035         產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓

產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣          產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價(jià)格：1980
庫(kù)存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字：NAD激酶試劑盒|活性檢測(cè)試劑盒|NADK活性檢測(cè)|試劑盒|微量法

簡(jiǎn)要介紹：
NADK（EC 2.7.1.23）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是目前所發(fā)現(xiàn)的生物體 內(nèi)*能夠催化 NAD+磷酸化生成 NADP+的酶，可催化 NAD（H）以 ATP 或無(wú)機(jī)多聚lin酸[poly(P)] 作為磷?；w進(jìn)行磷酸化反應(yīng)，生成 NADP（H）。因此，NAD 激酶在合成 NADP（H）以及調(diào)節(jié) NAD（H）與 NADP（H）的平衡上具有重要作用。 NADK 催化 NAD+磷酸化生成 NADP+，NADP+可被 6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原為 NADPH；在 340nm 下測(cè)定 NADPH 增加速率?？煞磻?yīng)出 NADK 活性的大小。
產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 25mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 50mL×1 瓶，4℃保存；
試劑三：粉劑×1 瓶，-20℃保存；
試劑四：粉劑×1 瓶，-20℃保存。

產(chǎn)品說(shuō)明：
NADK（EC 2.7.1.23）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是目前所發(fā)現(xiàn)的生物體 內(nèi)*能夠催化 NAD+磷酸化生成 NADP+的酶，可催化 NAD（H）以 ATP 或無(wú)機(jī)多聚lin酸[poly(P)] 作為磷?；w進(jìn)行磷酸化反應(yīng)，生成 NADP（H）。因此，NAD 激酶在合成 NADP（H）以及調(diào)節(jié) NAD（H）與 NADP（H）的平衡上具有重要作用。 NADK 催化 NAD+磷酸化生成 NADP+，NADP+可被 6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原為 NADPH；在 340nm 下測(cè)定 NADPH 增加速率?？煞磻?yīng)出 NADK 活性的大小。
操作步驟：

• 粗酶液提?。?/span> 

1. 細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液），超聲 波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10min， 取上清，置冰上待測(cè)。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 2、 血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

• 測(cè)定步驟和加樣表： 

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 將試劑一和試劑二 37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其他物種）水浴 15min 以上。

3. 工作液一的配制：在試劑三中加入 12mL 試劑一，充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保 存，禁止反復(fù)凍融。

工作液二的配制：在試劑四中加入 12mL 試劑一，充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

4. 加樣表

加完試劑混勻，室溫靜置 15min，340nm 下測(cè)定吸光值，ΔA＝A 測(cè)定-A 對(duì)照。

• NADK 活性計(jì)算： 

1. 血清（漿）NADK 活性

單位定義：每 mL 血清（漿）每分鐘生成 1nmol 的 NADP 定義為一個(gè)酶活力單位。 NADK（nmol/min/mL）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109 ]÷V 樣÷T =53.59×ΔA

2. 組織、細(xì)菌或細(xì)胞 NADK 活性

1. 按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘生成 1nmol 的 NADP 定義為一個(gè)酶活力單位。 NADK（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109 ]÷（V 樣×Cpr）÷T =53.59×ΔA÷Cpr

2. 按樣本鮮重計(jì)算

單位定義：每 g 組織每分鐘生成 1nmol 的 NADP 定義為一個(gè)酶活力單位。
NADK（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109 ]÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T =53.59×ΔA÷W

3. 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位定義：每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成 1nmol 的 NADP 定義為一個(gè)酶活力單位。 NADK（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109 ]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T =0.107×ΔA
V 反總：反應(yīng)體系總體積，5×10-4 L；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色 皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.1 ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，15 min； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬(wàn)。