β-木糖苷酶活性檢測試劑盒 微量法
- 發(fā)布日期： 2019-05-23
- 更新日期： 2025-07-09
產(chǎn)品詳請
| 產(chǎn)地 |
北京
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| 品牌 |
Solarbio
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| 貨號 |
BC2625
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| 保存條件 |
2-8℃保存
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| 英文名稱 |
Β-xylosidase activity assay kit
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| CAS編號 |
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| 保質(zhì)期 |
1年
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β-木糖苷酶（β- xylosidase）測定試劑盒說明書
微量法
英文名稱：Β-xylosidase activity assay kit
關(guān)鍵詞:β-木糖苷酶|β-木糖苷酶活性檢測|木糖苷酶
貨號：BC2625
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 1mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體 15mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 15mL×1 瓶，4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)液：液體1ml×1支，4℃保存，10μmol/ml對硝基ben酚溶液。
產(chǎn)品說明：
β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、細(xì)菌和真菌等生物體，是催化木聚糖類半纖維素降解的關(guān)鍵酶，產(chǎn)物木糖可作為碳源應(yīng)用于微生物發(fā)酵。另外，β-木糖苷酶還可以作為生物漂白劑應(yīng)用于造紙工業(yè)，比傳統(tǒng)的漂白法環(huán)保，具有廣泛的應(yīng)用價值。
β-木糖苷酶催化對硝基ben酚-β-D-木糖苷產(chǎn)生對硝基ben酚，對硝基ben酚在 405nm 處有特征吸收峰，測定 405nm 光吸收增加速率，可計算β-木糖苷酶活性。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板和蒸餾水。
操作步驟：
一、粗酶液提?。?/span>
1. 植物樣本：稱取約 0.1g 樣品，加 1mL 提取液充分冰浴勻漿，然后 12000rpm，4℃，離心 20min，
棄沉淀 ，取 20μL 上清測定蛋白含量，剩余上清作為待測酶液。
2. 細(xì)菌、真菌樣本：收集約 500 萬個細(xì)胞，加入 1mL 提取液，超聲波破碎（冰浴，功率 300w，超
聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 10000rpm，4℃，離心 10min，棄沉淀 ，取 20μL 上清
測定蛋白含量，剩余上清置于冰上待測。
3. 標(biāo)準(zhǔn)液的處理：用試劑二將標(biāo)準(zhǔn)液稀釋至 0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0μmol/ml。
二、測定操作表：
1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 405nm，對照管調(diào)零。
2、操作表
對照管 測定管 標(biāo)準(zhǔn)管
酶液（μL） 40 40 40
試劑一（μL） 10
試劑二（μL） 80 70 80
混勻，45℃水浴 20min
試劑三（μL） 80 80 80
混勻，靜置 5min，對照管調(diào)零， 微量石英比色皿/96 孔板，測定 405nm 吸光值，記為 A405。
β-木糖苷酶活性計算公式：
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度（x）和濃度（y，μmol/ml）建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，將△A帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，計算樣品生成的產(chǎn)物量（μmol/ml）。
1、按蛋白含量計算
酶活定義：45℃，pH7.4 時，每毫克蛋白質(zhì) 1min 內(nèi)催化產(chǎn)生 1 mol 對硝基ben酚的酶量為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性（μmol/min / mg prot）=(y×V 反總)÷(V 樣×Cpr)÷T=0.25×y÷Cpr
2、按樣本質(zhì)量計算：
酶活定義：45℃，pH7.4 時，每克樣品 1min 內(nèi)催化產(chǎn)生 1 mol 對硝基ben酚的酶量為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性（μmol/min /g）＝(y×V 反總)÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T=0.25×y ÷W
3. 按細(xì)胞數(shù)量計算：
酶活定義：45℃，pH7.4 時，每 10
4個細(xì)胞 1min 內(nèi)催化產(chǎn)生 1 mol 對硝基ben酚的酶量為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性（μmol/min /104cell）= (y×V 反總)÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=0.0005×y
Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；
V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL；
V 樣：加入反應(yīng)體系中
樣本體積，0.04mL；
V 樣總：加入提取液體積，1mL；
W：樣本質(zhì)量，g；
500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬；
T：反應(yīng)時間，20min。
注意事項：
1、 吸光度變化應(yīng)該控制在 0.05~0.6 之間。否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計算公式中參與計算的稀釋倍數(shù)要相應(yīng)改變。
2、 樣品蛋白質(zhì)含量需要另外測定，可選用考馬斯亮藍(lán)法蛋白含量測定試劑盒進(jìn)行測定
