產品名稱：3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)活性檢測試劑盒

產品英文名：  Glyceraldehyde-3-phosphate Dehydrogenase（GAPDH）Assay Kit

產品貨號：BC2210                  產地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯東U谷85A三樓

產品規(guī)格：50管/48樣                 產品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：7200
庫存狀態(tài)：現貨                          
關鍵字：3-磷酸甘油醛脫氫酶試劑盒|活性檢測試劑盒|GAPDH活性檢測|試劑盒


簡要介紹：
GAPDH 催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸，是糖酵解途徑的關鍵酶，與糖異生途徑、體內血糖濃度的維持和糖尿病的發(fā)生密切相關，在機體糖、脂、蛋白代謝紊亂疾病中發(fā)揮重要作用。
3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP 生成1,3 二磷酸甘油酸。GAPDH 逆向催化1,3二磷酸甘油酸和NADH 生成3 磷酸甘油醛、無機磷和NAD，340nm 處測定NADH 的減少量可反映GADPH 活性的高低。

產品詳細描述
產品內容： 
提取液一：25mL×1 瓶，4℃保存；
提取液二：25mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：粉劑×1 瓶，-20℃保存；
試劑二：液體25mL×1 瓶，4℃保存；
試劑三：液體14μL×1 支，4℃保存；
產品說明：
GAPDH 催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸，是糖酵解途徑的關鍵酶，與糖異生途徑、體內血糖濃度的維持和糖尿病的發(fā)生密切相關，在機體糖、脂、蛋白代謝紊亂疾病中發(fā)揮重要作用。
3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP 生成1,3 二磷酸甘油酸。GAPDH 逆向催化1,3二磷酸甘油酸和NADH 生成3 磷酸甘油醛、無機磷和NAD，340nm 處測定NADH 的減少量可反映GADPH 活性的高低。
需自備的儀器和用品
分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：

1. 組織樣品的前處理

（1）總GAPDH酶提取：建議稱取約0.1g 組織，加入1mL 提取液一，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔7s，總時間1min），然后8000g 4℃離心10min，取上清測定。
（2）胞漿和葉綠體GAPDH酶的分離：按照植物組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g 組織，加入1mL 提取液一），冰浴勻漿后于4℃ ，200g離心5min，棄沉淀，取上清在4℃8000g離心10min，取上清用于測定胞漿GAPDH酶的活性。取沉淀加入1ml提取液二，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔7s，總時間1min），然后4℃8000g離心10min，取上清測定葉綠體GAPDH酶的活性。
建議測定總GAPDH酶活性，按照步驟（1）提取粗酶液，若需要分別測定胞漿和線粒體中的GAPDH，則按照步驟（2）提取粗酶液。

2. 細菌或培養(yǎng)細胞的前處理

先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（10⁴ 個）：提取液一體積（mL）為500~1000：1 的比例（建議500 萬細菌或細胞加入1mL 提取液一），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30 次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
二、測定步驟
1、 分光光度計預熱30min 以上，調節(jié)波長至340nm，蒸餾水調零。
2、 樣本測定
（1）工作液的配制：將試劑二全部倒入試劑一瓶中，充分溶解，37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)預熱10 分鐘；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
（2）在試劑三中加入500μL 蒸餾水，充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
（3）在1mL 石英比色皿中加入30μL 樣本、20μL 試劑三和950μL 工作液，混勻，加入*一個試劑的同時開始計時，記錄340nm 處20s 時的吸光值A1 和 5min20s 后的吸光值A2，計算ΔA=A1-A2。
三、GAPDH 活性計算
（1）按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘消耗1 nmol 的NADH 定義為一個酶活力單位。
GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V 樣×Cpr) ÷T
=1072×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位的定義：每g 組織每分鐘消耗1 nmol 的NADH 定義為一個酶活力單位。
GAPDH（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T
=1072×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算
單位的定義：每1 萬個細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol 的NADH 定義為一個酶活力單位。
GAPDH（nmol/min /10⁴ cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T
=2.14×ΔA
V 反總：反應體系總體積，1×10^-3 L；ε：NADH 摩爾消光系數，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.03 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500 萬。