更多產(chǎn)品信息與報(bào)價(jià)請(qǐng)聯(lián)系QQ：2748554845，或者撥打電話：010-56371250

產(chǎn)品名稱：3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)活性檢測(cè)試劑盒 微量法

產(chǎn)品英文名： Micro Glyceraldehyde-3-phosphate Dehydrogenase（GAPDH）Assay Kit

產(chǎn)品貨號(hào)：BC2215               產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓

產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣                  產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價(jià)格：11700
庫(kù)存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字：3-磷酸甘油醛脫氫酶試劑盒|活性檢測(cè)試劑盒|GAPDH活性檢測(cè)|試劑盒|微量法


簡(jiǎn)要介紹：
GAPDH 催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸，是糖酵解途徑的關(guān)鍵酶，與糖異生途徑、體內(nèi)血糖濃度的維持和糖尿病的發(fā)生密切相關(guān)，在機(jī)體糖、脂、蛋白代謝紊亂疾病中發(fā)揮重要作用。
3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP 生成1,3 二磷酸甘油酸。GAPDH 逆向催化1,3二磷酸甘油酸和NADH 生成3 磷酸甘油醛、無(wú)機(jī)磷和NAD，340nm 處測(cè)定NADH 的減少量可反映GADPH 活性的高低。

產(chǎn)品詳細(xì)描述

產(chǎn)品內(nèi)容： 
提取液：100mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：粉劑×1 瓶，-20℃保存；
試劑二：液體 20mL×1 瓶，4℃保存；
試劑三：液體×1 支，4℃保存；

產(chǎn)品說(shuō)明：
GAPDH 催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸，是糖酵解途徑的關(guān)鍵酶，與糖異生途徑、體內(nèi)血糖濃度的維持和糖尿病的發(fā)生密切相關(guān)，在機(jī)體糖、脂、蛋白代謝紊亂疾病中發(fā)揮重要作用。
3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP 生成1,3 二磷酸甘油酸。GAPDH 逆向催化1,3二磷酸甘油酸和NADH 生成3 磷酸甘油醛、無(wú)機(jī)磷和NAD，340nm 處測(cè)定NADH 的減少量可反映GADPH 活性的高低。
需自備的儀器和用品
分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、 研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
樣本的前處理

1. 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：

先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10 4 個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液）， 超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2. 組織：

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加 入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟

1. 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。 2、樣本測(cè)定

1. 工作液的配制：將試劑二全部倒入試劑一瓶中，充分溶解，37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃(其 它物種)預(yù)熱10分鐘；現(xiàn)配現(xiàn)用。

2. 在試劑三中加入500μL蒸餾水，充分混勻待用；用不完的試劑 4℃保存一周。

3. 在微量石英比色皿或96孔板中加入5μL 樣本、5μL試劑三和190μL工作液，混勻，加入 *一個(gè)試劑的同時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí)，記錄340nm處20s時(shí)的吸光值A(chǔ)1和5min20s后的吸光值A(chǔ)2， 計(jì)算 ΔA=A1-A2。

GAPDH 活性計(jì)算

1. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

1. 按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(V 樣×Cpr) ÷T =1286×ΔA÷Cpr

2. 按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義：每g組織每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。 GAPDH（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(W×V樣÷V樣總) ÷T =1286×ΔA÷W

3. 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
GAPDH（nmol/min/10 4cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×10 9]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T =2.57×ΔA V 反總：反應(yīng)體系總體積，2×10 -4 L；
ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×10 3 L/mol/cm；d：比 色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.005 mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng) 時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬(wàn)。

2. 用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下 

1. 按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(V 樣×Cpr) ÷T =2572×ΔA÷Cpr

2. 按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義：每g組織每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。 GAPDH（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×10 9]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T =2572×ΔA÷W

3. 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
GAPDH（nmol/min/10 4cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×10 9]÷(500×V樣÷V樣總) ÷ T=5.144×ΔA V 反總：反應(yīng)體系總體積，2×10 -4 L；
ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×10 3 L/mol/cm；d：96 孔板光徑，0.5cm；V 樣：加入樣本體積，0.005 mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；T：反 應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬(wàn)。