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果糖-1,6-二磷酸（酯）酶(FBP)活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
注意:正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
英文名稱：Fructose-1,6-bisphosphatase (FBP)/fructose-1,6-diphosphatase activity assay kit
關(guān)鍵詞：果糖-1,6-二磷酸酶|二磷酸酶|FBP|FBP檢測
貨號: BC0920
規(guī)格: 50T/48S

產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 45mL 試劑四充分溶解待用，用不完的試劑于 4℃保存。
試劑二：液體 18μL×1 瓶，-20℃保存。臨用前加入 2.5mL 蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑分裝后-20℃分裝保存，避免反復(fù)凍融。
試劑三：液體 245μL×1 瓶，-20℃保存；臨用前加入 2.5mL 蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑分裝后-20℃分裝保存，避免反復(fù)凍融。
試劑四：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。

產(chǎn)品簡介：
果糖-1,6-二磷酸酶（Fructose 1,6-bisphosphatase，FBP）又稱果糖-1,6-二磷酸酯酶，其在糖異生過程和光合作用同化物蔗糖的合成中起關(guān)鍵性的作用。催化 1,6-二磷酸果糖和水生成 6-磷酸果糖和無機磷。
FBP 催化 1,6-二磷酸果糖和水，生成 6-磷酸果糖和無機磷，在反應(yīng)體系中添加的磷酸葡萄糖異構(gòu)酶和 6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化生成 6-磷酸葡萄糖酸和 NADPH，測定 340nm 下 NADPH 的增加速率，即可計算 FBP 活性。

試驗中所需的儀器和試劑：
紫外分光光度計、天平、低溫離心機、1mL 石英比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰盒、蒸餾水。

操作步驟：
一、粗酶液的提?。?/span>
組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 1mL 提取液）進行冰浴勻漿。于 4℃，8000g，離心 10min，取上清，置冰上待測。
細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min），于4℃，8000g，離心 10min，取上清，置冰上待測。

二、測定步驟：
1、分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、將試劑一 37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)預(yù)熱 10min。
3、操作表：(在 1mL 石英比色皿中依次加入下列試劑)
樣品名稱     測定管    空白管
樣本（μL）     100        -
提取液（μL）    -         100
試劑二（μL）   50         50
試劑三（μL）   50         50
試劑一（μL）  800         800
在 1mL 石英比色皿中分別加入上述試劑，充分混勻后于 340nm 處測定 10s 時的吸光值 A1，迅速置于 30℃水浴 5min，拿出迅速擦干測定 310s 時的吸光值 A2，計算△A 測定管= A2 測定-A1 測定，△A 空白管=A2 空白-A1 空白，△A=△A 測定管-△A 空白管。空白管只需做一次。

FBP 活性計算
（1）按蛋白濃度計算
單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘生成 1 nmol 的 NADPH 定義為一個酶活力單位。
FBP（U/mg prot）=?A÷（ε×d）×109×V 反總÷(Cpr×V 樣) ÷T=321.5×?A÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計算
單位的定義：每 g 組織每分鐘生成 1 nmol 的 NADPH 定義為一個酶活力單位。
FBP（U/g 鮮重）=?A÷（ε×d）×109×V 反總÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=321.5×?A÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算
單位的定義：每 104個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成 1 nmol 的 NADPH 定義為一個酶活力單位。
FBP（U/104 cell）=?A÷（ε×d）×109×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量（萬個）) ÷T=321.5×?A÷細(xì)胞數(shù)量（萬個）
V 反總：反應(yīng)體系總體積，1×10-3 L；
ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；
d：比色皿光徑，1cm；
V 樣：加入樣本體積，0.1 mL；
V 樣總：加入提取液體積，1 mL；
T：反應(yīng)時間，5 min；
Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；
W：樣本質(zhì)量，g；
109：單位換算系數(shù)，1mol=109nmol。

注意事項
1、 當(dāng)△A 大于 0.6 時，建議將樣稀釋后再進行測量。
2、 空白管為檢測各試劑組分質(zhì)量的檢測孔，正常情況下，變化不超過 0.02。