乙酰輔酶A羧化酶(ACC)活性檢測試劑盒 微量法
- 發(fā)布日期: 2019-05-24
- 更新日期: 2025-07-09
產(chǎn)品詳請
產(chǎn)地 |
北京
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品牌 |
Solarbio
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貨號 |
BC0415
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保存條件 |
2-8℃保存
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英文名稱 |
acetyl-CoA carboxylase (ACC) activity assay kit
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CAS編號 |
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保質(zhì)期 |
1年
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乙酰輔酶A羧化酶(ACC)活性檢測試劑盒 微量法
乙酰輔酶A 羧化酶(ACC)活性檢測試劑盒說明書
微量法
英文名稱:acetyl-CoA carboxylase (ACC) activity assay kit
關鍵詞:乙酰輔酶A羧化酶|乙酰輔酶A羧化酶檢測
注意:正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。
貨號:BC0415
規(guī)格:100T/48S
產(chǎn)品內(nèi)容:
提取液:100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:10mL×1 瓶, 4℃保存;
試劑二:粉劑×1 瓶,4℃保存;
試劑三:粉劑×1 瓶,-20℃保存;
試劑四:粉劑×1 瓶, 4℃保存。用時加入25mL 蒸餾水,溶解后4℃可保存一周。
試劑五:粉劑×1 瓶, 4℃保存。用時加入25mL 蒸餾水,溶解后4℃可保存一周。
試劑六:液體 25mL×1 瓶,室溫保存。
試劑七:10μmol/mL 標準磷貯備液 10mL×1 瓶,4℃保存。
產(chǎn)品說明:
ACC在生物體內(nèi)催化乙酰輔酶A羧化生成丙二酰輔酶A,是脂肪酸和許多次生代謝產(chǎn)物合成的關鍵酶。ACC的活性在一定程度上決定了脂肪酸的合成速度和含油量的高低。
ACC 能夠催化乙酰輔酶A、NaHCO3 和ATP 生成丙二酰輔酶A、ATP 和無機磷,通過鉬酸銨
定磷法測定無機磷的增加量來測定ACC 活性。
需自備的儀器和用品:
分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量比色皿/96孔板、研缽、
冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、樣本的前處理
1、細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104 個):
提取液體積(mL)為500~1000:1 的比例(建議500 萬細菌或細胞加入1mL 提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30 次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10 的比例(建議稱取約0.1g 組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
二、測定步驟
1、 分光光度計預熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長至660nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 酶促反應試劑的配制和預熱:在試劑二瓶中加入2.5mL 試劑一,充分溶解混勻;在試劑三瓶中加入2mL 蒸餾水,充分溶解混勻;將試劑一、二、三在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)預熱10 分鐘。
3、 定磷試劑的配制:按H2O: 試劑四:試劑五:試劑六=2:1:1:1 的比例配制,配好的定磷試劑應為淺黃色,若無色則試劑失效,若是藍色則為磷污染,定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。
注意:配試劑*用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器,也可以用一次性塑料器皿,避免磷污染。
4、0.5μmol/mL 標準磷應用液配制:將試劑七20 倍稀釋,即取 0.5mL 試劑七加9.5 蒸餾水,充分混勻。
5、酶促反應
試劑名稱(μL) 對照管 測定管
試劑一 90
試劑二 50
試劑三 40
樣本 10 10
37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)準確反應30min 后,90℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失),冷卻后,10000g 常溫離心5min,取上清。
6、定磷
標準管 空白管 對照管 測定管
0.5μmol/mL 標準磷應用液 20
蒸餾水 20
上清液 20 20
定磷試劑 180 180 180 180
混勻,37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴30min,冷卻至室溫,在 660nm 處,蒸餾水調(diào)零,記錄各管吸光值A。標準管、空白管只要做一次即可,每個測定管需要設一個對照管。
注意:若測定管吸光值大于2,將樣品用提取液稀釋適當倍數(shù)后再進行測定,使吸光值小于2,可提高檢測靈敏度,計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù)。
三、ACC 活性計算:
1、按組織蛋白濃度計算:
定義:每小時每毫克組織蛋白產(chǎn)生1μmol 無機磷的量為一個 ACC 活力單位。
ACC (U/mg prot)=(C 標準管×V 總)×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)÷(V 樣
×Cpr)÷T=10×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)÷Cpr
2、按樣本鮮重計算:
定義:每小時每g 組織產(chǎn)生1μmol 無機磷的量為一個 ACC 活力單位。
ACC (U/g 鮮重)=(C 標準管×V 總)×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)×V 總÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T=10×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)÷W
3、按細菌或細胞密度計算:
定義:每小時每500 萬細菌或細胞產(chǎn)生1μmol 無機磷的量為一個 ACC 活力單位。
ACC (U/104 cell)=(C 標準管×V 總)×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)×V 總
÷(500× V 樣÷V 樣總)÷T=0.02×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)
C 標準管:標準管濃度,0.5μmol/mL;
V 總:酶促反應總體積,0.5mL;
V 樣:加入樣本體積,0.05mL ;
V 樣總:加入提取液體積,1mL;
T:反應時間,0.5 小時;
Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;
W:樣本鮮重,g;
500:細菌或細胞總數(shù),500 萬。