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| 產(chǎn)地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號(hào) | BC1170 |
| 用途 | |
| 英文名稱 | Reduced glutathione (GSH) test kit |
| 包裝規(guī)格 | |
| 純度 | % |
| CAS編號(hào) | |
| 保質(zhì)期 | 1年 |
| 是否進(jìn)口 |
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 50 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 15mL×1 瓶，4℃避光保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑 10mg×1 支，4℃避光保存。
產(chǎn)品說(shuō)明：
谷胱甘肽是由谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Cys）和甘氨酸（Gly）組成的天然三肽，是一種含 巰基（—SH）的化合物，廣泛存在于動(dòng)物組織、植物組織、微生物和酵母中。谷胱甘肽能和 5,5’- 二硫代-雙-（2-硝基苯甲酸）（5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反應(yīng)產(chǎn)生 2-硝基-5-巰基苯甲 酸和谷胱甘肽二硫化物（GSSG）。2-硝基-5-巰基苯甲酸為黃色產(chǎn)物，在波長(zhǎng) 412nm 處具有*光 吸收。
自備儀器和用品：分析天平、微量勻漿器（規(guī)格 2mL）、低溫離心機(jī)、水浴鍋、移液器、可見(jiàn)分光光度計(jì)，1mL 玻璃比色皿。
一、樣品的處理
1、組織處理：
新鮮組織首先用 PBS 沖洗 2 次，然后稱取動(dòng)物組織或者植物組織 0.1g。加入用試劑一潤(rùn)洗過(guò) 的勻漿器中（勻漿器提前放冰上預(yù)冷）；然后加入 1mL 試劑一（組織/試劑一比例保持不變即可）， 迅速冰上充分研磨（使用液氮研磨效果更好）；8000g 4℃離心 10min；取上清液放置于 4℃待測(cè)， 若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80℃保存（可保存 10 天）。
2、血液處理：
血漿：將收集的抗凝血于 4℃，600g 離心 10 分鐘，吸取上層血漿到另一支試管中，加入等體 積的試劑一, 4℃，8000g 離心 10 分鐘,將上清移入新的試管中放置于 4℃待測(cè)，若暫時(shí)不能完成測(cè) 試可放于-80℃保存（可保存 10 天）。
血細(xì)胞：將收集的抗凝血于 4℃，600g 離心 10 分鐘，棄去上層血漿用 3 倍體積的 PBS 清洗 3 次（用 PBS 重懸血細(xì)胞，600g 離心 10 分鐘），加入等體積試劑一，混勻后 4℃放置 10 分鐘，8000g 離心 10 分鐘，吸取上清放于 4℃待測(cè)，若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80℃保存（可保存 10 天）。
3、細(xì)胞處理
收集不少于 10 6個(gè)細(xì)胞，首先用 PBS 清洗細(xì)胞 2 次（PBS 重懸細(xì)胞，600g 離心 10 分鐘），加 入 3 倍細(xì)胞沉淀體積的試劑一重懸細(xì)胞，反復(fù)凍融 2-3 次（可在液氮中凍結(jié)，37℃水浴中溶解），8000g 離心 10 分鐘，收集上清于 4℃待測(cè)，若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80℃保存（可保存 10 天）。
二、操作步驟
1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，分光光度計(jì)調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 412nm，蒸餾水調(diào)零。
2、試劑二放置 37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（一般物種）水浴中保溫 30min。
3、空白管檢測(cè)：取 1mL 玻璃比色皿，依次加入 100μL 蒸餾水，700μL 試劑二，200μL 試劑三，混 勻，放置 2min 后測(cè)定 412nm 吸光度 A1。
4、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線 稱 1mg 標(biāo)準(zhǔn)品用 1mL 蒸餾水溶解，濃度為 1mg/mL。取適當(dāng)溶液配制濃度為 200μg/mL、 100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL、12.5μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)品（試劑一十倍稀釋后進(jìn)行稀釋）。 取 1.5mLEP 管依次加入 100μL 標(biāo)準(zhǔn)品，700μL 試劑二，200μL 試劑三，每管混勻后靜置 2min， 檢測(cè) 412nm 處吸光度，吸光度減去空白孔（A1）為橫坐標(biāo)，根據(jù)吸光度（x）和濃度（y，μg/mL） 做出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
5、樣品管測(cè)定：取 1mL 玻璃比色皿，依次加入 100μL 樣品，700μL 試劑二，200μL 試劑三，混勻 后靜置 2min 檢測(cè) 412nm 處吸光度 A2，△A= A2- A1。
三、GSH 含量計(jì)算
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將樣品△A 帶入公式中（x），計(jì)算出樣品濃度 y（μg/mL）。
（1）按蛋白濃度計(jì)算 GSH（μg / mg prot）=y×V 反總÷V 樣÷Cpr =y×10÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算 GSH（μg /g）= y×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)= y×10 ÷W
（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算 GSH（μg /10 4 cell）= y×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量)= y×10 ÷細(xì)胞數(shù)量 （4）按液體體積計(jì)算 GSH（μg / mL）= y×V 反總÷V 樣= y×10 V 反總：反應(yīng)總體積，1mL；V 樣總：上清液總體積，1 mL；V 樣：加入反應(yīng)體系中上清液 體積，100μL=0.1 mL；W：樣品質(zhì)量，g ；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL。
注意事項(xiàng)：
1、樣品處理需勻漿完全，若當(dāng)天不能完成測(cè)量，可放-80℃保存。
2、標(biāo)準(zhǔn)品：還原型谷胱甘肽現(xiàn)配現(xiàn)用。
3、若不確定樣品中 GSH 含量的高低，可稀釋幾個(gè)梯度后再進(jìn)行測(cè)量。
4、因?yàn)樵噭┮恢泻械鞍踪|(zhì)沉淀劑，因此上清液不能用于蛋白濃度測(cè)定。
相關(guān)文獻(xiàn)：
《Trimetazidine restores the positive adaptation to exercise training by mitigating statin‐induced skeletal muscle injury》 作者:Ming Song , Fang‐fang Chen , Yi‐hui Li, Lei Zhang , Feng Wang, Ran‐ran Qin ,Zhi‐hao Wang , Ming Zhong , Meng‐xiong Tang , Wei Zhang , Lu Han 期刊:Journal of Cachexia, Sarcopenia and Muscle 影響因子:10.754 PMID:29152896
《Composition Analysis by UPLC-PDA-ESI (?)-HRMS and Antioxidant Activity Using Saccharomyces cerevisiae Model of Herbal Teas and Green Teas from Hainan》 作者: Hua Li, Lanying Wang and Yanping Luo 期刊:molecules 影響因子:3.06 PMID:30301226
《MicroRNA-98 reduces amyloid β-protein production and improves oxidative stress and mitochondrial dysfunction through the Notch signaling pathway via HEY2 in Alzheimer's disease mice》 作者:Fang?Zhou Chen Ying Zhao Hui?Zhao Chen 期刊:International Journal of Molecular Medicine 影響因子:2.928 PMID:30365070
《Inhibition of MUC1‐C regulates metabolism by AKT pathway in esophageal squamous cell carcinoma》 作者:Xin GongSun YongQiang Zhao Bin Jiang ZhongWei Xin Mo Shi Liang Song QiMing Qin Qiang Wang XiangYan Liu 期刊:J. Cell. Physiol. 影響因子:4.522 PMID:30523643
《Light-Responsive Metal–Organic Framework as an OxidaseMimic for Cellular Glutathione Detection》 作者:Yufeng Liu,Min Zhou,Wen Cao,Xiaoyu Wang,Quan Wang,Sirong Li and Hui Wei 期刊:Anal Chem. 影響因子:6.35 PMID:31148448
