產(chǎn)品名稱：還原型谷胱甘肽(GSH)含量檢測(cè)試劑盒 微量法

產(chǎn)品英文名：Micro Reduced Glutathione (GSH) Assay Kit

產(chǎn)品貨號(hào)：BC1175                 產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓

產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣               產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價(jià)格：340
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字：還原型谷胱甘肽試劑盒|活性檢測(cè)試劑盒|GSH含量檢測(cè)|試劑盒|微量法


簡要介紹：
GSH 是細(xì)胞內(nèi)最主要的抗氧化巰基物質(zhì)，在抗氧化、蛋白質(zhì)巰基保護(hù)和氨基酸跨膜運(yùn)輸?shù)戎芯哂兄匾饔?。還原型與氧化型比值（GSH/GSSG）是細(xì)胞氧化還原狀態(tài)的主要?jiǎng)討B(tài)指標(biāo)。因此，測(cè)定細(xì)胞內(nèi) GSH 和 GSSG 含量以及 GSH/GSSG 比值，能夠很好地反映細(xì)胞所處的氧化還原狀態(tài)。 
    DTNB 與 GSH 反應(yīng)生成復(fù)合物，在 412nm 處有特征吸收峰；其吸光度與 GSH 含量成正比。 

產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體 1 瓶，100mL，4℃保存。
試劑二：液體 1 瓶，20 mL，4℃保存。
試劑三：液體 1 瓶，8 mL，4℃避光保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑 1 支，10mg，4℃避光保存。

產(chǎn)品說明：
谷胱甘肽是由谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Cys）和甘氨酸（Gly）組成的天然三肽，是一種含巰基（—SH）的化合物，廣泛存在于動(dòng)物組織、植物組織、微生物和酵母中。谷胱甘肽能和5,5’-二硫代-雙-（2-硝基ben甲酸）（5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反應(yīng)產(chǎn)生2-硝基-5-巰基ben甲酸和谷胱甘肽二硫化物（GSSG）。2-硝基-5-巰基ben甲酸為黃色產(chǎn)物，在波長412nm處具有*光吸收。
自備儀器和用品：
分析天平、微量勻漿器（規(guī)格 2mL）、低溫離心機(jī)、水浴鍋、移液器、可見分光光度計(jì)或酶標(biāo) 儀、超微量比色皿或 96 孔板。
樣品的處理
1、組織處理：
新鮮組織首先用PBS沖洗2次，然后稱取動(dòng)物組織或者植物組織0.1g。加入用試劑一潤洗過的勻漿器中（勻漿器提前放冰上預(yù)冷）；然后加入1ml試劑一（組織/試劑一比例保持不變即可），迅速冰上充分研磨（使用液氮研磨效果更好）；8000g 4℃離心10min；取上清液放置于4℃待測(cè)，若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80℃保存（可保存10天）。
2、血液處理
血漿：將收集的抗凝血于4℃，600g離心10分鐘，吸取上層血漿到另一支試管中，加入等體積的試劑一, 4℃，8000g離心10分鐘,將上清移入新的試管中放置于4℃待測(cè)，若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80℃保存（可保存10天）。
血細(xì)胞：將收集的抗凝血于4℃，600g離心10分鐘，棄去上層血漿用3倍體積的PBS清洗3次（用PBS重懸血細(xì)胞，600g離心10分鐘），加入等體積試劑一，混勻后4℃放置10分鐘，8000g離心10分鐘，吸取上清放于4℃待測(cè)，若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80℃保存（可保存10天）。
3、細(xì)胞處理
收集不少于10⁶個(gè)細(xì)胞，首先用PBS清洗細(xì)胞2次（PBS重懸細(xì)胞，600g離心10分鐘），加入3倍細(xì)胞沉淀體積的試劑一重懸細(xì)胞，反復(fù)凍融2-3次（可在液氮中凍結(jié)，37℃水浴中溶解），8000g離心10分鐘，收集上清于4℃待測(cè)，若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80℃保存（可保存10天）。
操作步驟

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，分光光度計(jì)調(diào)節(jié)波長至412nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑二放置37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（一般物種）水浴中保溫30min。

3. 空白管檢測(cè)：取1ml比色皿，依次加入100μL蒸餾水，700μL試劑二，200μL試劑三，混勻，放置2min后測(cè)定412nm吸光度A1。

4. 制作標(biāo)準(zhǔn)曲線

稱1mg標(biāo)準(zhǔn)品用1ml蒸餾水溶解，濃度為1mg/ml。取適當(dāng)溶液配制濃度為200μg/ml、100μg/ml、50μg/ml、25μg/ml、12.5μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品（試劑一十倍稀釋后進(jìn)行稀釋）。
取1.5mlEP管依次加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品，700μL試劑二，200μL試劑三，每管混勻后靜置2min，檢測(cè)412nm處吸光度，吸光度減去空白孔（A1）為橫坐標(biāo)，根據(jù)吸光度（x）和濃度（y，μg/ml）做出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

5. 樣品管測(cè)定：取1ml比色皿，依次加入100μL樣品，700μL試劑二，200μL試劑三，混勻后靜置2min檢測(cè)412nm處吸光度A2，△A= A2- A1。

GSH含量計(jì)算
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將樣品△A帶入公式中（x），計(jì)算出樣品濃度y（μg/ml）。
（1）按蛋白濃度計(jì)算 
GSH（μg / mg prot）=y×V 反總÷V 樣÷Cpr =y×10÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算 
GSH（μg /g）= y×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)= y×10 ÷W
（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算 
GSH（μg /10⁴ cell）= y×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量)= y×10 ÷細(xì)胞數(shù)量 
（4）按液體體積計(jì)算 
GSH（μg / mL）= y×V 反總÷V 樣= y×10
V 反總：反應(yīng)總體積，1mL；V 樣總：上清液總體積，1 mL；V 樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，100μL=0.1 mL；W：樣品質(zhì)量，g ；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL。 
注意事項(xiàng)：

1. 樣品處理需勻漿完全，若當(dāng)天不能完成測(cè)量，可放-80℃保存。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品：還原型谷胱甘肽現(xiàn)配現(xiàn)用。

3. 若不確定樣品中GSH含量的高低，可稀釋幾個(gè)梯度后再進(jìn)行測(cè)量。

4. 因?yàn)樵噭?/span>一中含有蛋白質(zhì)沉淀劑，因此上清液不能用于蛋白濃度測(cè)定。

相關(guān)文獻(xiàn)：

《MicroRNA-98 reduces amyloid β-protein production and improves oxidative stress and mitochondrial dysfunction through the Notch signaling pathway via HEY2 in Alzheimer's disease mice》 作者:Fang?Zhou Chen， Ying Zhao， Hui?Zhao Chen 期刊:International Journal of Molecular Medicine 影響因子:2.928 PMID:30365070
《Composition Analysis by UPLC-PDA-ESI (?)-HRMS and Antioxidant Activity Using Saccharomyces cerevisiae Model of Herbal Teas and Green Teas from Hainan》 作者: Hua Li, Lanying Wang and Yanping Luo 期刊:molecules 影響因子:3.06 PMID:30301226
《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影響因子:5.657 PMID:31022448
《Photoactivated oxidase mimetics derived from dicyandiamide and barbituric acid for colorimetric detection of glutathione》 作者:Guorong Li,Qingqin Wang,Yarong Wu,Yi Li,Liangqia Guo 期刊:Spectrochim Acta A Mol Biomol Spectrosc 影響因子:2.931 PMID:30851688