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產(chǎn)地 | 北京 |
品牌 | Solarbio |
貨號(hào) | BC1175 |
用途 | 還原型谷胱甘肽(GSH)測(cè)試 |
英文名稱 | Reduced glutathione (GSH) test kit |
包裝規(guī)格 | 100管/96樣 |
純度 | 現(xiàn)詢客服% |
CAS編號(hào) | |
保質(zhì)期 | 1年 |
是否進(jìn)口 | 否 |
產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣 產(chǎn)品商標(biāo):solarbio
保存與運(yùn)輸:4℃保存或-20℃保存; 參考價(jià)格:340
庫存狀態(tài):現(xiàn)貨
關(guān)鍵字:還原型谷胱甘肽試劑盒|活性檢測(cè)試劑盒|GSH含量檢測(cè)|試劑盒|微量法
簡要介紹:
GSH 是細(xì)胞內(nèi)最主要的抗氧化巰基物質(zhì),在抗氧化、蛋白質(zhì)巰基保護(hù)和氨基酸跨膜運(yùn)輸?shù)戎芯哂兄匾饔?。還原型與氧化型比值(GSH/GSSG)是細(xì)胞氧化還原狀態(tài)的主要?jiǎng)討B(tài)指標(biāo)。因此,測(cè)定細(xì)胞內(nèi) GSH 和 GSSG 含量以及 GSH/GSSG 比值,能夠很好地反映細(xì)胞所處的氧化還原狀態(tài)。
DTNB 與 GSH 反應(yīng)生成復(fù)合物,在 412nm 處有特征吸收峰;其吸光度與 GSH 含量成正比。
產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容:
試劑一:液體 1 瓶,100mL,4℃保存。
試劑二:液體 1 瓶,20 mL,4℃保存。
試劑三:液體 1 瓶,8 mL,4℃避光保存。
標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑 1 支,10mg,4℃避光保存。
產(chǎn)品說明:
谷胱甘肽是由谷氨酸(Glu)、半胱氨酸(Cys)和甘氨酸(Gly)組成的天然三肽,是一種含巰基(—SH)的化合物,廣泛存在于動(dòng)物組織、植物組織、微生物和酵母中。谷胱甘肽能和5,5’-二硫代-雙-(2-硝基ben甲酸)(5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid,DTNB)反應(yīng)產(chǎn)生2-硝基-5-巰基ben甲酸和谷胱甘肽二硫化物(GSSG)。2-硝基-5-巰基ben甲酸為黃色產(chǎn)物,在波長412nm處具有*光吸收。
自備儀器和用品:
分析天平、微量勻漿器(規(guī)格 2mL)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、移液器、可見分光光度計(jì)或酶標(biāo) 儀、超微量比色皿或 96 孔板。
樣品的處理
1、組織處理:
新鮮組織首先用PBS沖洗2次,然后稱取動(dòng)物組織或者植物組織0.1g。加入用試劑一潤洗過的勻漿器中(勻漿器提前放冰上預(yù)冷);然后加入1ml試劑一(組織/試劑一比例保持不變即可),迅速冰上充分研磨(使用液氮研磨效果更好);8000g 4℃離心10min;取上清液放置于4℃待測(cè),若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80℃保存(可保存10天)。
2、血液處理
血漿:將收集的抗凝血于4℃,600g離心10分鐘,吸取上層血漿到另一支試管中,加入等體積的試劑一, 4℃,8000g離心10分鐘,將上清移入新的試管中放置于4℃待測(cè),若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80℃保存(可保存10天)。
血細(xì)胞:將收集的抗凝血于4℃,600g離心10分鐘,棄去上層血漿用3倍體積的PBS清洗3次(用PBS重懸血細(xì)胞,600g離心10分鐘),加入等體積試劑一,混勻后4℃放置10分鐘,8000g離心10分鐘,吸取上清放于4℃待測(cè),若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80℃保存(可保存10天)。
3、細(xì)胞處理
收集不少于106個(gè)細(xì)胞,首先用PBS清洗細(xì)胞2次(PBS重懸細(xì)胞,600g離心10分鐘),加入3倍細(xì)胞沉淀體積的試劑一重懸細(xì)胞,反復(fù)凍融2-3次(可在液氮中凍結(jié),37℃水浴中溶解),8000g離心10分鐘,收集上清于4℃待測(cè),若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80℃保存(可保存10天)。
操作步驟
分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,分光光度計(jì)調(diào)節(jié)波長至412nm,蒸餾水調(diào)零。
試劑二放置37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(一般物種)水浴中保溫30min。
空白管檢測(cè):取1ml比色皿,依次加入100μL蒸餾水,700μL試劑二,200μL試劑三,混勻,放置2min后測(cè)定412nm吸光度A1。
制作標(biāo)準(zhǔn)曲線
稱1mg標(biāo)準(zhǔn)品用1ml蒸餾水溶解,濃度為1mg/ml。取適當(dāng)溶液配制濃度為200μg/ml、100μg/ml、50μg/ml、25μg/ml、12.5μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品(試劑一十倍稀釋后進(jìn)行稀釋)。
取1.5mlEP管依次加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品,700μL試劑二,200μL試劑三,每管混勻后靜置2min,檢測(cè)412nm處吸光度,吸光度減去空白孔(A1)為橫坐標(biāo),根據(jù)吸光度(x)和濃度(y,μg/ml)做出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
樣品管測(cè)定:取1ml比色皿,依次加入100μL樣品,700μL試劑二,200μL試劑三,混勻后靜置2min檢測(cè)412nm處吸光度A2,△A= A2- A1。
GSH含量計(jì)算
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,將樣品△A帶入公式中(x),計(jì)算出樣品濃度y(μg/ml)。
(1)按蛋白濃度計(jì)算
GSH(μg / mg prot)=y×V 反總÷V 樣÷Cpr =y×10÷Cpr
(2)按樣本質(zhì)量計(jì)算
GSH(μg /g)= y×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)= y×10 ÷W
(3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
GSH(μg /104 cell)= y×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量)= y×10 ÷細(xì)胞數(shù)量
(4)按液體體積計(jì)算
GSH(μg / mL)= y×V 反總÷V 樣= y×10
V 反總:反應(yīng)總體積,1mL;V 樣總:上清液總體積,1 mL;V 樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,100μL=0.1 mL;W:樣品質(zhì)量,g ;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mL。
注意事項(xiàng):
樣品處理需勻漿完全,若當(dāng)天不能完成測(cè)量,可放-80℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品:還原型谷胱甘肽現(xiàn)配現(xiàn)用。
若不確定樣品中GSH含量的高低,可稀釋幾個(gè)梯度后再進(jìn)行測(cè)量。
因?yàn)樵噭?/span>一中含有蛋白質(zhì)沉淀劑,因此上清液不能用于蛋白濃度測(cè)定。
相關(guān)文獻(xiàn):
《MicroRNA-98 reduces amyloid β-protein production and improves oxidative stress and mitochondrial dysfunction through the Notch signaling pathway via HEY2 in Alzheimer's disease mice》 作者:Fang?Zhou Chen, Ying Zhao, Hui?Zhao Chen 期刊:International Journal of Molecular Medicine 影響因子:2.928 PMID:30365070
《Composition Analysis by UPLC-PDA-ESI (?)-HRMS and Antioxidant Activity Using Saccharomyces cerevisiae Model of Herbal Teas and Green Teas from Hainan》 作者: Hua Li, Lanying Wang and Yanping Luo 期刊:molecules 影響因子:3.06 PMID:30301226
《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影響因子:5.657 PMID:31022448
《Photoactivated oxidase mimetics derived from dicyandiamide and barbituric acid for colorimetric detection of glutathione》 作者:Guorong Li,Qingqin Wang,Yarong Wu,Yi Li,Liangqia Guo 期刊:Spectrochim Acta A Mol Biomol Spectrosc 影響因子:2.931 PMID:30851688