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北京索萊寶科技有限公司
產(chǎn)品展廳
氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量測(cè)試盒 (可見(jiàn)光分光光度法) BC1180
  • 品牌:Solarbio
  • 產(chǎn)地:北京
  • 貨號(hào):BC1180
  • 發(fā)布日期: 2019-12-09
  • 更新日期: 2025-07-09
產(chǎn)品詳請(qǐng)
產(chǎn)地 北京
品牌 Solarbio
貨號(hào) BC1180
用途
英文名稱 Oxidized glutathione (GSSG) content test kit
包裝規(guī)格
純度 %
CAS編號(hào)
保質(zhì)期 1年
是否進(jìn)口

產(chǎn)品說(shuō)明:

氧化型谷胱甘肽(GSSG)是谷胱甘肽(GSH)的氧化形式,又稱為二硫代谷胱甘肽,是 兩分子的谷胱甘肽氧化而成。GSSG 會(huì)被谷胱甘肽還原酶還原成 GSH,因此機(jī)體中大多數(shù)是以 還原型方式存在。測(cè)定細(xì)胞內(nèi) GSH 和 GSSG 含量以及 GSH/GSSG 比值,能夠很好地反映細(xì)胞所 處的氧化還原狀態(tài)。本試劑盒利用谷胱甘肽能和 5,5’-二硫代-雙-(2-硝基苯甲酸)(5,5’ -dithiobis-2-nitrobenoic acid,DTNB)反應(yīng)產(chǎn)生 2-硝基-5-巰基苯甲酸,2-硝基-5-巰基 苯甲酸在波長(zhǎng) 412nm 處具有*光吸收的特點(diǎn),通過(guò) 2-乙烯吡啶抑制樣品中原有的還原型 谷胱甘肽,然后利用谷胱甘肽還原酶將 GSSG 還原為GSH,借此測(cè)定氧化型谷胱甘肽的含量。

 

自備儀器和用品:

分析天平、微量勻漿器(規(guī)格 2ml)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、移液器、可見(jiàn)分光光度計(jì)、 Solarbio 1ml 比色皿。

 

一、樣品的處理

1、組織處理:

新鮮組織首先用 PBS 沖洗 2 次,然后稱取動(dòng)物組織或者植物組織 0.1g。加入用試劑Ⅰ潤(rùn)洗 過(guò)的勻漿器中(勻漿器提前放冰上預(yù)冷);然后加入 1ml 試劑Ⅰ(組織/試劑Ⅰ比例保持不變 即可),迅速冰上充分研磨(使用液氮研磨效果更好);10000rpm 4℃離心 10min;取上清液 放置于 4℃待測(cè),若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80℃保存(可保存 10 天)。

2、血液處理:

血漿:將收集的抗凝血于 4℃,600g 離心 10 分鐘,吸取上層血漿到另一支試管中,加入等體 積的試劑一, 4℃,8000g 離心 10 分鐘,將上清移入新的試管中放置于 4℃待測(cè),若暫時(shí)不能完成測(cè) 試可放于-80℃保存(可保存 10 天)。

血細(xì)胞:將收集的抗凝血于 4℃,600g 離心 10 分鐘,棄去上層血漿用 3 倍體積的 PBS 清洗 3 次(用 PBS 重懸血細(xì)胞,600g 離心 10 分鐘),加入等體積試劑一,混勻后 4℃放置 10 分鐘,8000g 離心 10 分鐘,吸取上清放于 4℃待測(cè),若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80℃保存(可保存 10 天)。

3、細(xì)胞處理

收集不少于 108個(gè)細(xì)胞,首先用 PBS 清洗細(xì)胞 2 次(PBS 重懸細(xì)胞,600g 離心 10 分鐘),加 入 3 倍細(xì)胞沉淀體積的試劑一重懸細(xì)胞,反復(fù)凍融 2-3 次(可在液氮中凍結(jié),37℃水浴中溶解),8000g 離心 10 分鐘,收集上清于 4℃待測(cè),若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80℃保存(可保存 10 天)。

 

二、操作步驟

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,分光光度計(jì)調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 412nm,蒸餾水調(diào)零。

2、試劑二放置 37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃(一般物種)水浴中保溫 30min。

3、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:將標(biāo)準(zhǔn)品用 1ml 蒸餾水溶解(4℃保存),濃度為 1mg/ml。取適當(dāng)溶液配 制濃度為 25 g/ml、20 g/ml、12.5 g/ml、6.25 g/ml、3.125 g/ml、0 g/ml 的標(biāo)準(zhǔn) 品(試劑Ⅰ十倍稀釋后進(jìn)行稀釋)。

4、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線 孵育完成后標(biāo)準(zhǔn)管依次加入 700μ L 試劑Ⅲ,100 μ L 試劑Ⅳ,100 μ L 試劑Ⅴ,10 μ L 試劑Ⅵ,迅速混勻后,測(cè)定 412nm 處 30 s 和 150 s 光吸收 A1 和 A2。吸光度(A2-A1)為橫 坐標(biāo),濃度為縱坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

5、樣品管依次加入 700μ L 試劑Ⅲ,100 μ L 試劑Ⅳ,100 μ L 試劑Ⅴ,10 μ L 試劑Ⅵ, 迅速混勻后,測(cè)定 412nm 處 30 s 和 150 s 光吸收 A1 和 A2。

 

三、GSH 含量計(jì)算

將樣品△A(即 A2 減去 A1)帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線公式,即可計(jì)算出每 0.1g 組織或相應(yīng)血液、細(xì)胞 樣品中氧化型谷胱甘肽的含量。

 

注意事項(xiàng):

1、樣品處理需勻漿完全,若當(dāng)天不能完成測(cè)量,可放-80℃保存。
2、若不確定樣品中 GSSG 含量的高低,可稀釋幾個(gè)梯度后再進(jìn)行測(cè)量。
3、此方法利用酶促反應(yīng)速率計(jì)算底物濃度,盡量準(zhǔn)確在 30 秒和 150 秒處完成讀數(shù)。
4、因?yàn)樵噭裰泻械鞍踪|(zhì)沉淀劑,因此上清液不能用于蛋白濃度測(cè)定。
5、本試劑盒所配制的試劑除測(cè)定 48 個(gè)樣品外,至少可做 4 次標(biāo)準(zhǔn)曲線。

 

相關(guān)文獻(xiàn):

《Composition Analysis by UPLC-PDA-ESI (?)-HRMS and Antioxidant Activity Using Saccharomyces cerevisiae Model of Herbal Teas and Green Teas from Hainan》 作者: Hua Li, Lanying Wang and Yanping Luo 期刊:molecules 影響因子:3.06 PMID:30301226 


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