|
| 產(chǎn)地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號(hào) | BC1185 |
| 用途 | |
| 英文名稱(chēng) | Oxidized glutathione (GSSG) content test kit |
| 包裝規(guī)格 | |
| 純度 | % |
| CAS編號(hào) | |
| 保質(zhì)期 | 1年 |
| 是否進(jìn)口 |
產(chǎn)品說(shuō)明：
氧化型谷胱甘肽（GSSG）是谷胱甘肽（GSH）的氧化形式，又稱(chēng)為二硫代谷胱甘肽，是 兩分子的谷胱甘肽氧化而成。GSSG 會(huì)被谷胱甘肽還原酶還原成 GSH,因此機(jī)體中大多數(shù)是以 還原型方式存在。測(cè)定細(xì)胞內(nèi) GSH 和 GSSG 含量以及 GSH/GSSG 比值，能夠很好地反映細(xì)胞所 處的氧化還原狀態(tài)。本試劑盒利用谷胱甘肽能和 5,5’-二硫代-雙-（2-硝基苯甲酸）（5,5’ -dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反應(yīng)產(chǎn)生 2-硝基-5-巰基苯甲酸，2-硝基-5-巰基 苯甲酸在波長(zhǎng) 412nm 處具有*光吸收的特點(diǎn)，通過(guò) 2-乙烯吡啶抑制樣品中原有的還原型 谷胱甘肽，然后利用谷胱甘肽還原酶將 GSSG 還原為GSH，借此測(cè)定氧化型谷胱甘肽的含量。
自備儀器和用品：
分析天平、微量勻漿器（規(guī)格 2ml）、低溫離心機(jī)、水浴鍋、移液器、可見(jiàn)分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀、 微量玻璃 比色皿或 96 孔板。
一、樣品的處理
1、組織處理：
新鮮組織首先用 PBS 沖洗 2 次，然后稱(chēng)取動(dòng)物組織或者植物組織 0.1g。加入用試劑Ⅰ潤(rùn)洗 過(guò)的勻漿器中（勻漿器提前放冰上預(yù)冷）；然后加入 1ml 試劑Ⅰ（組織/試劑Ⅰ比例保持不變 即可），迅速冰上充分研磨（使用液氮研磨效果更好）；10000rpm 4℃離心 10min；取上清液 放置于 4℃待測(cè)，若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80℃保存（可保存 10 天）。
2、血液處理：
血漿：將收集的抗凝血于 4℃，600g 離心 10 分鐘，吸取上層血漿到另一支試管中，加入等體 積的試劑一, 4℃，8000g 離心 10 分鐘,將上清移入新的試管中放置于 4℃待測(cè)，若暫時(shí)不能完成測(cè) 試可放于-80℃保存（可保存 10 天）。
血細(xì)胞：將收集的抗凝血于 4℃，600g 離心 10 分鐘，棄去上層血漿用 3 倍體積的 PBS 清洗 3 次（用 PBS 重懸血細(xì)胞，600g 離心 10 分鐘），加入等體積試劑一，混勻后 4℃放置 10 分鐘，8000g 離心 10 分鐘，吸取上清放于 4℃待測(cè)，若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80℃保存（可保存 10 天）。
3、細(xì)胞處理
收集不少于 108個(gè)細(xì)胞，首先用 PBS 清洗細(xì)胞 2 次（PBS 重懸細(xì)胞，600g 離心 10 分鐘），加 入 3 倍細(xì)胞沉淀體積的試劑一重懸細(xì)胞，反復(fù)凍融 2-3 次（可在液氮中凍結(jié)，37℃水浴中溶解），8000g 離心 10 分鐘，收集上清于 4℃待測(cè)，若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80℃保存（可保存 10 天）。
二、操作步驟
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 412nm，分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。
2、試劑二放置 37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（一般物種）水浴中保溫 30min。
3、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)簩?biāo)準(zhǔn)品用 1ml 蒸餾水溶解(4℃保存)，濃度為 10mg/ml。取適當(dāng)溶液配制濃度 為 25μg/ml、20μg/ml、12.5μg/ml、6.25μg/ml、3.125μg/ml、0μg/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品（試劑一十倍稀釋后進(jìn) 行稀釋?zhuān)?/span>
4、取 0.5ml 離心管，加入 20μL 稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品或樣品，加入 1μL 試劑二，混勻后 37℃孵育 30 分 鐘。
5、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線 孵育完成后標(biāo)準(zhǔn)管依次加入 140μL 試劑三，20 μL 試劑四，20 μL 試劑五，2 μL 試劑六，迅速混勻 后，測(cè)定 412nm 處 30 s 和 150 s 光吸收 A1 和 A2。吸光度（A2-A1）為橫坐標(biāo)（x），濃度為縱坐標(biāo) （y）做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
6、樣品管依次加入 140μL 試劑三，20 μL 試劑四，20 μL 試劑五，2 μL 試劑六，迅速混勻后，測(cè)定 412nm 處 30 s 和 150 s 光吸收 A1 和 A2，△A= A2- A1。
三、GSH 含量計(jì)算
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將樣品△A 帶入公式中（x），計(jì)算出樣品濃度 y（μg/ml）。
（1）按蛋白濃度計(jì)算
GSSG（μg / mg prot）=y×V 反總÷V 樣÷Cpr =y×10.15÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算
GSSG（μg /g）= y×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)= y×10.15 ÷W
（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
GSSG（μg /10
4 cell）= y×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量)= y×10.15 ÷細(xì)胞數(shù)量
（4）按液體體積計(jì)算
GSSG（μg / mL）= y×V 反總÷V 樣= y×10
V 反總：反應(yīng)總體積，0.203mL；V 樣總：上清液總體積，1 mL；V 樣：加入反應(yīng)體系中上清
液體積，20μL=0.02 mL；W：樣品質(zhì)量，g ；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL。
注意事項(xiàng)：
1、樣品處理需勻漿完全，若當(dāng)天不能完成測(cè)量，可放-80℃保存。
2、若不確定樣品中 GSSG 含量的高低，可稀釋幾個(gè)梯度后再進(jìn)行測(cè)量。
3、此方法利用酶促反應(yīng)速率計(jì)算底物濃度，盡量準(zhǔn)確在 30 秒和 150 秒處完成讀數(shù)。
4、因?yàn)樵噭┮恢泻械鞍踪|(zhì)沉淀劑，因此上清液不能用于蛋白濃度測(cè)定。
相關(guān)文獻(xiàn)：
《Trimetazidine restores the positive adaptation to exercise training by mitigating statin‐induced skeletal muscle injury》 作者:Ming Song , Fang‐fang Chen , Yi‐hui Li, Lei Zhang , Feng Wang, Ran‐ran Qin ,Zhi‐hao Wang , Ming Zhong , Meng‐xiong Tang , Wei Zhang , Lu Han 期刊:Journal of Cachexia, Sarcopenia and Muscle 影響因子:10.754 PMID:29152896
《Composition Analysis by UPLC-PDA-ESI (?)-HRMS and Antioxidant Activity Using Saccharomyces cerevisiae Model of Herbal Teas and Green Teas from Hainan》 作者: Hua Li, Lanying Wang and Yanping Luo 期刊:molecules 影響因子:3.06 PMID:30301226
《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影響因子:5.657 PMID:31022448
更多產(chǎn)品信息與報(bào)價(jià)請(qǐng)聯(lián)系QQ：2748554845，或者撥打電話：010-56371250
公司地址：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷?85A
?公司傳真：?010-56371281
