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| 產(chǎn)地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號(hào) | BC1230 |
| 用途 | |
| 英文名稱(chēng) | Ascorbic acid (AsA) content test kit |
| 包裝規(guī)格 | |
| 純度 | % |
| CAS編號(hào) | |
| 保質(zhì)期 | 1年 |
| 是否進(jìn)口 |
產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體100mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：液體20mL×1瓶，4℃保存；
試劑三：液體×1瓶，4℃保存。臨用前加入2.5mL試劑二，混勻；
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1瓶（棕色），4℃保存。臨用前配置，加入5.679mL蒸餾水充分溶解；吸取0.01mL上述溶液，加入0.99mL蒸餾水，混勻，即100μmol/L AsA。
產(chǎn)品說(shuō)明:
AsA 又稱(chēng)維生素c。AsA 是輔酶、自由基清除劑、電子共體/受體和草酸鹽與酒石酸鹽生物合成的底物等。作為植物細(xì)胞中最重要的抗氧化劑，AsA 在保護(hù)葉綠體免于氧化損傷起著舉足輕重的作用，也是衡量農(nóng)作物產(chǎn)品品質(zhì)的重要指標(biāo)之一。
抗壞血酸氧化酶（AAO）催化 AsA 氧化生成 DHA，通過(guò)測(cè)定 AsA 的氧化速率，即可計(jì)算出 AsA 含量。
自備儀器和用品：
研缽、冰、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、可調(diào)式移液器、蒸餾水。
操作步驟：
樣品中 AsA 提?。?/span>
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約 0.1g 組織，加入 1mL 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心 20min，取上清置冰上待測(cè)。
2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10 個(gè)）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1mL 試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；8000g，4℃離心 20min，取上清液置冰上混勻待測(cè)。
3. 血清等液體：直接測(cè)定。
AsA 測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 265 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在 25℃水浴鍋中預(yù)熱 30 min。
3. 標(biāo)準(zhǔn)管：依次在比色皿中加入 100μL 標(biāo)準(zhǔn)液、800μL 試劑二和 100μL 試劑三，迅速混勻，在 265nm 測(cè)定，記錄 30s 和 150s 的吸光值 A1 和 A2，△A 標(biāo)準(zhǔn)管= A1 －A2。
4. 測(cè)定管：依次在比色皿中加入 100μL 上清液、800μL 試劑二和 100μL 試劑三，迅速混勻，在 265nm 測(cè)定，記錄 30 s 和 150s 的吸光值 A3 和 A4，△A 測(cè)定管= A3 －A4。
注意：標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。
AsA 含量計(jì)算公式:
按蛋白濃度計(jì)算
AsA (nmol/mg prot) =[C 標(biāo)準(zhǔn)液×△A 測(cè)定管÷△A 標(biāo)準(zhǔn)管×V 標(biāo)準(zhǔn)]÷（Cpr×V 樣）
=100×△A 測(cè)定管÷△A 標(biāo)準(zhǔn)管÷Cpr
按樣本質(zhì)量計(jì)算
AsA(nmol/g) =[C 標(biāo)準(zhǔn)液×△A 測(cè)定管÷△A 標(biāo)準(zhǔn)管×V 標(biāo)準(zhǔn)]÷(W×V 樣÷V 樣總)
=100×△A 測(cè)定管÷△A 標(biāo)準(zhǔn)管÷W
按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
AsA(nmol/104 cell) =[C 標(biāo)準(zhǔn)液×△A 測(cè)定管÷△A 標(biāo)準(zhǔn)管×V 標(biāo)準(zhǔn)]÷(細(xì)胞數(shù)量×V 樣÷V 樣總)
=100×△A 測(cè)定管÷△A 標(biāo)準(zhǔn)管÷細(xì)胞數(shù)量
（4）按液體體積計(jì)算
AsA (nmol/mL) =[C 標(biāo)準(zhǔn)液×△A 測(cè)定管÷△A 標(biāo)準(zhǔn)管×V 標(biāo)準(zhǔn)]÷V 樣
=100×△A 測(cè)定管÷△A 標(biāo)準(zhǔn)管
C 標(biāo)準(zhǔn)液：100μmol/L；V 標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)液體積，0.1mL；V 樣總：上清液總體積，1.0 mL=0.001 L；V 樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，0.1mL；Cpr ：蛋白含量，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g。
注意事項(xiàng)：
試劑三和標(biāo)準(zhǔn)品現(xiàn)配現(xiàn)用，配制好的 4℃保存，3 天內(nèi)使用完。
*檢出限為 10μ mol/L。
相關(guān)文獻(xiàn)：
《Effect of 1α, 25-dihydroxyvitamin D3 on the osteogenic differentiation of human periodontal ligament stem cells and the underlying regulatory mechanism》 作者:Yawen Ji， Panpan Zhang， Yixiao Xing， Linglu Jia， Yunpeng Zhang， Tingting Jia， Xuan Wu， Bin Zhao， Xin Xu 期刊:International Journal of Molecular Medicine 影響因子:2.928 PMID:30365053
