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| 產(chǎn)地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號(hào) | BC0680 |
| 用途 | |
| 英文名稱 | Lactate Dehydrogenase Kit (LDH) |
| 包裝規(guī)格 | |
| 純度 | % |
| CAS編號(hào) | |
| 保質(zhì)期 | 1年 |
| 是否進(jìn)口 |
測(cè)定意義：
LDH（EC 1.1.1.27）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是糖酵解途徑的末端酶，催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應(yīng)，伴隨著NAD+/NADH之間互變。
測(cè)定原理：
LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸進(jìn)一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在堿性溶液中顯棕紅色，顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。
試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：
可見分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣品測(cè)定的準(zhǔn)備：
1. 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清，按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積 （mL）為 500-1000:1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴， 功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次） ，8000g4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為 1:5-10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液）， 進(jìn)行冰浴勻漿；8000g4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 3. 血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
二、測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 450nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 樣本測(cè)定（在 EP 管中加入下列試劑）
試劑名稱(μL) 測(cè)定管 對(duì)照管
樣本 50 50 試劑一 250 250 試劑二 50 蒸餾水 50 充分混勻，37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）水浴 15min
試劑三 250 250 充分混勻，37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）水浴 15min 試劑四 750 750 充分混勻，室溫靜置 3min，450nm 下測(cè)定吸光度，計(jì)算ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管需要設(shè)一個(gè)對(duì) 照管。
LDH活力單位計(jì)算：
1. 標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸曲線， y=0.725x (x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度，μmol/mL；y 為對(duì)吸光度)。 2. 血清（漿）LDH 活力的計(jì)算 單位的定義：每 mL 血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。 LDH（U/mL）=ΔA÷0.725÷T×103=92×ΔA 3. 細(xì)胞、細(xì)菌和組織中 LDH 活力的計(jì)算 （1） 按樣本蛋白濃度計(jì)算： 單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。 LDH（U/mgprot）=[ΔA÷0.725×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =92×ΔA÷Cpr 需要另外測(cè)定，建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒。 （2） 按樣本鮮重計(jì)算： 單位的定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。 LDH（U/g 鮮重）=[ΔA÷0.725×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =92×ΔA÷W （3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算： 單位的定義：每 1 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。 LDH（U/104 cell）=[ΔA÷0.725×V1]÷(500×V1÷V2)÷T×103 =0.184×ΔA÷W V1：加入反應(yīng)體系中樣本的體積，0.05mL；V2：加入提取液的體積，1mL； T：反應(yīng)時(shí) 間，15min；Cpr： 蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g;500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬。
相關(guān)文獻(xiàn)：
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《Enhancing the electricity generation and sludge reduction of sludge microbial fuel cell with graphene oxide and reduced graphene oxide》 作者:Hanmin Zhang,Zongyang Da,Yujie Feng,Yuezhu Wang,Lu Cai,Hongtao,Cui 期刊:Journal of Cleaner Production 影響因子:6.395 PMID:
《Involvement of the two l-lactate dehydrogenase in development and pathogenicity in Fusarium graminearum》 作者:Wenchan ChenLingling WeiYu ZhangDongya ShiWeichao RenZhihui ZhangJin WangWenyong ShaoXiali LiuChangjun ChenEmail authorQingli Gao 期刊:Curr Genet 影響因子:3.464 PMID:30474697
《Caspase 3 may participate in the anti-tumor immunity of dendritic cells》 作者:JinqiangLiuab1FeiWangac1DandanYind1HongweiZhangaFanFeng 期刊:Biochemical and Biophysical Research Communications 影響因子:2.705 PMID:30797554
《Curcumin attenuates hypoxia/reoxygenation?induced cardiomyocyte injury by downregulating Notch signaling》 作者:Peng Zhu Manli Yang Hao He Zhibin Kuang Mu Liang Anxiao Lin Song Liang Qiyun Wen Zhiqin Cheng Chaofeng Sun 期刊:Mol Med Rep 影響因子:1.851 PMID:31257466
《Alginate/chondroitin sulfate based hybrid hydrogel with different molecular weight and its capacity to regulate chondrocytes activity.》 作者:Ma Fenbo,Pang Xiangchao,Tang Bin 期刊:Carbohydr Polym 影響因子:6.044 PMID:30553317
《Upregulation of miRNA‐223‐3p ameliorates RIP3‐mediated necroptosis and inflammatory responses via targeting RIP3 after spinal cord injury》 作者:Yang Wang, Jianhang Jiao, Pengfei Ren, Minfei Wu 期刊:Journal of cellular physiology 影響因子:4.522 PMID:30821011
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