產(chǎn)品名稱：乳酸脫氫酶(LDH)活性檢測試劑盒 微量法

產(chǎn)品英文名：  Micro Lacate Dehydrogenase（LDH）Assay Kit

產(chǎn)品貨號：BC0685              產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓

產(chǎn)品規(guī)格：100管/48樣                 產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：390
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字：乳酸脫氫酶試劑盒|活性檢測試劑盒|LDH活性檢測|試劑盒|微量法

簡要介紹：
LDH（EC 1.1.1.27）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是糖酵解途徑的末端酶，催化丙tong酸與乳酸之間的可逆反應(yīng)，伴隨著NAD+/NADH之間互變。
    LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙tong酸，丙tong酸進(jìn)一步與2, 4 - 二硝基ben肼作用生成丙tong酸二硝基ben腙，在堿性溶液中顯棕紅色，顏色深淺與丙tong酸濃度成正比。  

產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體60mL×1瓶， 4℃保存；
試劑一：液體7 mL×1瓶， 4℃保存； 
試劑二：粉劑×1支，-20℃保存，用時加入1.3 mL雙蒸水充分溶解備用，配好后可分裝成小管-20 ℃保存，可保存兩周，禁止反復(fù)凍融；
試劑三：液體7 mL×1瓶，4℃保存； 
試劑四：液體25 mL×1瓶，4℃保存；
丙tong酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液：液體1 mL×1支，4℃保存，2mmol/ml。
產(chǎn)品簡介：
LDH（EC 1.1.1.27）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是糖酵解途徑的末端酶，催化丙tong酸與乳酸之間的可逆反應(yīng)，伴隨著NAD⁺/NADH之間互變。
LDH催化NAD⁺氧化乳酸生成丙tong酸，丙tong酸進(jìn)一步與2, 4 - 二硝基ben肼作用生成丙tong酸二硝基ben腙，在堿性溶液中顯棕紅色，顏色深淺與丙tong酸濃度成正比。
試驗中所需的儀器和試劑：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、粗酶液提取：   

1. 細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10⁴個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20%或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2. 血清（漿）樣品：直接檢測。

3. 丙tong酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液：取100ml標(biāo)準(zhǔn)液，倍比稀釋至1、0.5、0.25、0.125、0 mmol/ml，用2、1、0.5、0.25、0.125、0 mmol/ml做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

二、測定操作表：

1. 分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至450nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 樣本測定

充分混勻，37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）準(zhǔn)確水浴15min

充分混勻，37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴15min

充分混勻，室溫靜置3min，取200μL轉(zhuǎn)移至微量石英比色皿或在96孔板中，450 nm下測定吸光度，計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管需要設(shè)一個對照。
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管測定值和濃度做標(biāo)準(zhǔn)曲線，y為標(biāo)準(zhǔn)品濃度，μmol/mL；x為對吸光度。
LDH活力單位計算：

1. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下：

1. 標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸曲線， y = 0.725x (x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度，μmol/mL；y 為對吸光度)。

2. 血清（漿）LDH 活力的計算

單位的定義：每 mL 血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 丙tong酸定義為一個酶活力單位。
LDH（U/mL）=ΔA÷0.725÷T×10 3=92×ΔA

3. 細(xì)胞、細(xì)菌和組織中 LDH 活力的計算

1. 按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1 nmol 丙tong酸定義為一個酶活力單位。
LDH（U/mg prot）=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (V1×Cpr) ÷T×10 3 =92×ΔA÷Cpr 需要另外測定，建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。

2. 按樣本鮮重計算：

單位的定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 丙tong酸定義為一個酶活力單位。 LDH（U/g 鮮重）=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (W ×V1÷V2) ÷T×10 3 =92×ΔA÷W （3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：
單位的定義：每 1 萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 丙tong酸定義為一個酶活力單位。
LDH（U/10 4 cell）= [ΔA÷0.725×V 1]÷(500 ×V1÷V2) ÷T×10 3 =0.184×ΔA÷W V1：加入反應(yīng)體系中樣本的體積，0.01 mL；V2：加入提取液的體積，1 mL； T：反應(yīng)時間，15 min；Cpr： 蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g; 500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬。10 3：1μmol/mL=10 3nmol/mL。

2. 用 96 孔板測定的計算公式如下： 

1. 標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸曲線， y = 0.3625x (x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度，μmol/mL；y 為對吸光度)。

2. 血清（漿）LDH 活力的計算

單位的定義：每 mL 血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 丙tong酸定義為一個酶活力單位。
LDH（U/mL）=ΔA÷0.3625÷T×10 3=184×ΔA

3. 細(xì)胞、細(xì)菌和組織中 LDH 活力的計算

1. 按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1 nmol 丙tong酸定義為一個酶活力單位。
LDH（U/mg prot）=[ΔA÷0.3625×V 1] ÷ (V1×Cpr) ÷T×10 3 =184×ΔA÷Cpr 需要另外測定，建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。

2. 按樣本鮮重計算：

單位的定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 丙tong酸定義為一個酶活力單位。 LDH（U/g 鮮重）=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (W ×V1÷V2) ÷T×10 3 =184×ΔA÷W （3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：
單位的定義：每 1 萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 丙tong酸定義為一個酶活力單位。
LDH（U/10 4 cell）= [ΔA÷0.3625×V 1]÷(500 ×V1÷V2) ÷T×10 3 =0.368×ΔA÷W V1：加入反應(yīng)體系中樣本的體積，0.01 mL；V2：加入提取液的體積，1 mL； T：反應(yīng)時間，15 min；Cpr： 蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g; 500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬。10 3：1μmol/mL=10 3nmol/mL。

相關(guān)文獻(xiàn)：

《Exogenous hydrogen sulfide ameliorates high glucose-induced myocardial injury & inflammation via the CIRP-MAPK signaling pathway in H9c2 cardiac cells》 作者:Hong-Lei Zhao,Bao-Quan Wua,YingLuo,Wen-Ying Zhang,Yun-Ling Hao,Jin-Jie Liang,Fang Fang,Wei Liu,Xie-Hui,Chen 期刊:Life Sciences 影響因子:3.448 PMID:29857073
《Ablation of caspase-1 protects against TBI-induced pyroptosis in vitro and in vivo》 作者:Wei Liu, Yuhua Chen, Jiao Meng, Minfei Wu, Fangfang Bi, Cuicui Chang, Hua Li & Liangjun Zhang  期刊:Journal of Neuroinflammationvolume 影響因子:5.7 PMID:29458437
《Effects of Quercetin on Proliferation and H2O2-Induced Apoptosis of Intestinal Porcine Enterocyte Cells》 作者:Zhigang Chen , Qiaoling Yuan , Guangren Xu , Huiyu Chen , Hongyu Lei  and Jianming Su 期刊:Molecules 影響因子:3.06 PMID:
《Enhancing the electricity generation and sludge reduction of sludge microbial fuel cell with graphene oxide and reduced graphene oxide》 作者:Hanmin Zhang,Zongyang Da,Yujie Feng,Yuezhu Wang,Lu Cai,Hongtao,Cui 期刊:Journal of Cleaner Production 影響因子:6.395 PMID:
《Down-regulation of miR-320 exerts protective effects on myocardial I-R injury via facilitating Nrf2 expression.》 作者:Zhu XA, Gao LF, Zhang ZG, Xiang DK. 期刊:Eur Rev Med Pharmacol Sci 影響因子:2.721 PMID:30840298