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| 產(chǎn)地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號 | BC1460 |
| 用途 | |
| 英文名稱 | Glutamate dehydrogenase (GDH) test kit |
| 包裝規(guī)格 | |
| 純度 | % |
| CAS編號 | |
| 保質(zhì)期 | 1年 |
| 是否進(jìn)口 |
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存； 試劑一：液體 60mL×1 瓶，4℃保存； 試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃保存。
產(chǎn)品說明：
GDH（EC 1.4.1.2）廣泛分布于植物中，和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同參與谷氨酸的合成， 在氨同化和轉(zhuǎn)化成有機氮化合物的代謝中起重要作用。 GDH 催化 NH4+、α-酮戊二酸和 NADH，生成谷氨酸和 NAD+，引起 340nm 吸光度下降。通過 測定 340nm 吸光度的下降速率，計算 GDH 活性。
試驗所需自備的儀器和用品： 紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、移液器、1mL 石英比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、粗酶液提?。?1、收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲 波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率 20％，超聲 3 秒，間隔 10 秒，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10 分鐘， 取上清，置冰上待測。 2、稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待 測。
二、測定步驟： 1、紫外分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 340nm，蒸餾水調(diào)零。 2、樣本測定 （1）工作液的配制：臨用前將試劑一加入試劑二中混合溶解，置于 37℃（哺乳動物）或 25℃（其 它物種）水浴 5min； （2）取 1mL 工作液和 0.05mL 樣本于光徑為 1cm 的 1mL 石英比色皿中，混勻，加樣本的同時開始 計時，在 340 nm 波長下記錄 20 秒時的初始吸光度 A1 和 5 分 20 秒時的吸光度 A2，計算?A=A1-A2。
三、GDH 活性計算： （1）按樣本蛋白濃度計算： 單位的定義： mg 組織蛋白分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。 GDH（U/mg prot）＝[?A×V 反總÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V 樣) ÷T=675×?A÷Cpr（2）按樣本鮮重計算： 單位的定義： g 組織分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。 GDH（U/g 鮮重）＝[?A×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T=675×?A÷W （3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算： 單位的定義： 1 萬個細(xì)菌或細(xì)胞分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。 GDH（U/104 cell）＝[?A×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣÷V 樣總×500)÷T=1.35×?A V 反總：反應(yīng)體系總體積，1.05×10-3 L；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比 色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.05 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間， 5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬。
注意事項： 1、當(dāng)?A 大于 0.5 時，將樣本進(jìn)行稀釋后測。 2、由于提取液中含有一定濃度的蛋白（約 1mg/mL），所以在測定樣品蛋白濃度時需要去提取液 本身的蛋白含。
相關(guān)文獻(xiàn)：
《Knockout of SlSBPASE Suppresses Carbon Assimilation and Alters Nitrogen Metabolism in Tomato Plants》 作者:Fei Ding, Qiannan Hu, Meiling Wang and Shuoxin Zhang 期刊:International Journal of Molecular Sciences 影響因子:4.183 PMID:30558146
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