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| 產(chǎn)地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號(hào) | BC0430 |
| 保存條件 | 2-8℃保存 |
| 英文名稱(chēng) | ADPG pyrophosphorylase (AGP) test kit |
| CAS編號(hào) | |
| 保質(zhì)期 | 1年 |
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣 產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存； 參考價(jià)格：2200
庫(kù)存狀態(tài)：現(xiàn)貨
關(guān)鍵字: ADPG焦磷酸化酶檢測(cè)試劑盒|AGP檢測(cè)試劑盒|ADPG焦磷酸化酶|試劑盒
簡(jiǎn)要介紹：
AGP催化葡萄糖-1-磷酸與ATP反應(yīng)生成淀粉合成的直接前體ADPG，是植物淀粉生物合成的主要限速步驟。
AGP催化的逆向反應(yīng)生成G1P，在反應(yīng)體系中添加的磷酸己糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，340nm下測(cè)定NADPH增加速率，即可計(jì)算AGP活性。
產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體25mL×1瓶，4℃保存;
試劑一：液體10mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前每支加入4mL雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑仍-20℃保存；
試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入3mL雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑仍-20℃保存；
試劑四：粉劑×1支，-20℃保存；臨用前每支加入500μL雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑-20℃保存；
試劑五：液體250μL×1支，-20℃保存。
產(chǎn)品說(shuō)明：
AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中，催化葡萄糖-1-磷酸（G1P）與ATP反應(yīng)生成淀粉合成的直接前體ADPG，是植物淀粉生物合成的主要限速步驟。
AGP催化的逆向反應(yīng)生成G1P，在反應(yīng)體系中添加的磷酸己糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，340nm下測(cè)定NADPH增加速率，即可計(jì)算AGP活性。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水
操作步驟：
一、粗酶液制備
稱(chēng)取約0.1g組織加入1mL提取液，冰浴中勻漿。10000g ，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
二、測(cè)定步驟
分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。
在EP管中按順序加入下列試劑（如果一次性測(cè)定樣本較多，可以將試劑一、二按比例配成混合液1，將試劑一、三、四和五按比例配成混合液2）
| 試劑名稱(chēng)（μL） | 測(cè)定管 |
| 試劑一 | 100 |
| 試劑二 | 160 |
| 樣本 | 20 |
混勻，30℃保溫15 min，置沸水浴中1 min（蓋緊，防止水分散失），冰浴迅速冷卻。試劑一、試劑三置37℃保溫10min以上。
| 試劑一 | 300 |
| 試劑三 | 100 |
| 試劑四 | 20 |
| 試劑五 | 10 |
混勻后立即在340nm波長(zhǎng)下記錄初始吸光度A1和 2min后的吸光度A2，計(jì)算ΔA=A2-A1。
三、AGP活性計(jì)算
1、按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活性單位。
AGP活性（U/mg prot）＝ΔA÷ε÷d×V反總÷T÷（Cpr×V樣本）=2854×ΔA÷Cpr。
此法需要自行測(cè)定粗酶液蛋白質(zhì)濃度。
2、按照樣本鮮重計(jì)算
單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
AGP活性（U/g 鮮重）＝ΔA÷ε÷d×V反總÷T÷（W×V樣本÷V提取）=2854×ΔA÷W。
T：反應(yīng)時(shí)間，2min；ε：NADPH消光系數(shù)，6.22×10-3mL˙nmol-1˙cm-1；V反總：反應(yīng)總體積，0.71mL；d:石英比色皿光程，1cm；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；V樣本：加入的樣本體積，0.02mL；V提?。杭尤氲奶崛∫后w積，1mL；W：樣本鮮重，g。
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