產(chǎn)品名稱:：  α酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)活性檢測試劑盒 微量法

產(chǎn)品英文名:  Micro αKetoglutarate Dehydrogenase(α-KGDH) Assay Kit

產(chǎn)品貨號：BC0715                 產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓

測定意義：

α-KGDH（EC 1.2.4.2）廣泛存在于動物、植物微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中，是三羧酸循環(huán)調(diào)控關(guān)鍵酶之一，催化α-酮戊二酸氧化脫羧生成琥珀酰輔酶A。

測定原理：

α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+ 和輔酶A生成琥珀酰輔酶A、 二氧化碳和 NADH，NADH在340 nm有特征吸收峰，以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。

需要的儀器，耗材:

紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

α-KGDH（EC1.2.4.2）廣泛存在于動物、植物微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中，是三羧酸循環(huán)調(diào)控關(guān)鍵酶之一，催化α-酮戊二酸氧化脫羧生成琥珀酰輔酶A。
    α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+和輔酶A生成琥珀酰輔酶A、二氧化碳和NADH，NADH在340nm有特征吸收峰，以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。

產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體110mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：液體1mL×1支，-20℃保存；
試劑三：液體22mL×1瓶，4℃保存；
試劑四：粉劑×1支，4℃保存；
試劑五：粉劑×1支，4℃保存；
試劑六：粉劑×1支，-20℃保存；
試劑七：粉劑×1支，-20℃保存；
試劑八：粉劑×1支，-20℃避光保存。臨用前加入0.8mL雙蒸水充分混勻待用，用不完的試劑仍-20℃保存。
工作液的配制：臨用前把試劑四、試劑五、試劑六、試劑七轉(zhuǎn)移到試劑三中混合溶解待用。

操作步驟：
一、α-KGDH的提取
稱取約0.1g組織或收集約500萬細(xì)胞，加入1mL試劑一和10uL試劑二，冰浴用勻漿器或研缽充分研磨，4 ℃ 11000 g離心10min，取上清，置冰上待測。

• 測定步驟

1. 分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。

   2. 空白管：
取200μL工作液加入微量石英比色皿或96孔板中，37℃孵育5min后取出比色皿，再依次加入8μL試劑八和12μL蒸餾水，混勻并立即測量340nm處0s的吸光值A1，37℃準(zhǔn)確反應(yīng)2min，記錄340nm處2min時的吸光值A2，計算ΔA空白=A2-A1。
3.測定管：
取200μL工作液加入微量石英比色皿或96孔板中，在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）孵育5min后取出比色皿，再依次加入8μL試劑八和12μL樣本，混勻并立即測量340nm處0s的吸光值A3，37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）中準(zhǔn)確反應(yīng)2min，記錄340nm處2min時的吸光值A4，計算ΔA測定=A4-A3。

相關(guān)文獻：

《Inhibition of?α?ketoglutarate dehydrogenase activity afects adventitious root growth in?poplar via?changes in?GABA shunt》 作者:Jianyun?Yue,Changjian?Du,Jing?Ji,Tiantian?Xie, Wei?Chen,Ermei?Chang, Lanzhen?Chen, Zeping?Jiang,Shengqing?Shi
 期刊:Planta 影響因子:3.06 PMID:
《lncRNA Ftx promotes aerobic glycolysis and tumor progression through the PPARγ pathway in hepatocellular carcinoma》 作者:Xiao Li, Qi Zhao, Jianni Qi, Wenwen Wang ,Di Zhang ,Zhen Li, Chengyong Qin 期刊:International Journal of Oncology 影響因子:3.571 PMID:29845188