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產(chǎn)地 | 北京 |
品牌 | Solarbio |
貨號 | BC0955 |
用途 | |
英文名稱 | Succinate dehydrogenase (SDH) detection kit |
包裝規(guī)格 | |
純度 | % |
CAS編號 | |
保質(zhì)期 | 1年 |
是否進口 |
產(chǎn)品內(nèi)容:
試劑一:液體60mL×1瓶,-20℃保存;
試劑二:液體0.6mL×1瓶,-20℃保存;
試劑三:液體5mL×1瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入到試劑三中溶解待用;
試劑五:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入4mL雙蒸水,用不完的試劑仍4℃保存;
試劑六:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入3.333mL雙蒸水,用不完的試劑4℃保存。
產(chǎn)品說明:
SDH(EC 1.3.5.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中。SDH是線粒體的一種標(biāo)志酶 ,位于線粒體內(nèi)膜 上的一種膜結(jié)合酶,是連接呼吸電子傳遞和氧化磷酸化的樞紐之一。此外,為多種原核細胞產(chǎn)能的呼吸鏈 提供電子。
SDH催化琥珀酸脫氫生成延胡索酸,脫下的氫通過吩嗪二甲酯硫酸(PMS)傳遞還原2,6-二氯fen靛酚(DCPIP),并且在600nm處具有特征吸收峰,通過600nm吸光度的變化,測定2.6-DPIP的還原速度,代表SDH酶活性。
試驗所需自備儀器和樣品:
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、SDH的提取
準(zhǔn)確稱取0.1g組織或收集500萬細胞,加入1mL試劑一和10uL 試劑二,用冰浴勻漿器或研缽勻漿充分研磨,4 ℃ 11000 g離心10min,取上清,置冰上待測。
二、測定步驟和加樣表
分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至600nm,蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定
試劑名稱(μL) | 測定管 | 空白管 |
試劑三 | 60 | 60 |
試劑五 | 60 | 60 |
蒸餾水 | 800 | 800 |
37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)保溫10min左右 | ||
樣本 | 30 | |
蒸餾水 | 30 | |
試劑六 | 30 | 30 |
依次加各試劑到1 mL比色皿中,在加入試劑六的同時開始計時;在600 nm波長下記錄20秒時的初始吸光度A1,比色后迅速將比色皿連同反應(yīng)液一起放入37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴中,準(zhǔn)確反應(yīng)1分鐘;迅速取出比色皿并擦干,600 nm下比色,記錄1分20秒時的吸光度A2,計算ΔA=A1-A2,得到ΔA測定,ΔA空白。
相關(guān)文獻:
《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影響因子:5.657 PMID:31022448