產品名稱:：γ-谷氨酰轉肽酶(γ-GT)活性檢測試劑盒

產品英文名：

產品貨號：BC1220       產地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓

產品規(guī)格：50管/48樣          產品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：260
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關鍵字：：γ-谷氨酰轉肽酶試劑盒|活性檢測試劑盒|γ-GT含量檢測|試劑盒|

簡要介紹：
γ-GT是γ-谷氨酰循環(huán)中的關鍵酶，催化GSH降解。γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨酰基化合物上的γ-谷氨?；D移到受體。也可以催化GSH和其他γ-谷氨?；衔锏乃?，產生谷氨酸鹽，在細胞外谷胱甘肽新陳代謝中起了重要的作用。 
    γ-GT催化谷氨酰對硝基ben胺中γ-谷氨酰基轉移給N-甘氨酰甘氨酸，生成對硝基ben胺，在405nm有特征光吸收；通過測定405nm光吸收增加速率，來計算γ-GT酶活性。  

產品詳細描述
產品內容：
提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體12.5mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體44.5mL×1瓶，4℃保存。
工作液（在試劑一瓶中配制）：臨用前配制，把試劑二倒入試劑一瓶中，充分溶解（室溫過低時可以40℃水浴促進溶解）；然后把試劑三倒入試劑一瓶中，混勻后室溫保存。
標準液：液體5mL×1瓶，4℃保存。5mmol/L對硝基ben胺標準液。若不溶解，放于沸水浴中溶解。
產品說明：
γ-GT是γ-谷氨酰循環(huán)中的關鍵酶，催化GSH降解。γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨?；衔锷系?/span>γ-谷氨?；D移到受體。也可以催化GSH和其他γ-谷氨?；衔锏乃?，產生谷氨酸鹽，在細胞外谷胱甘肽新陳代謝中起了重要的作用。
γ-GT催化谷氨酰對硝基ben胺中γ-谷氨?；D移給N-甘氨酰甘氨酸，生成對硝基ben胺，在405nm有特征光吸收；通過測定405nm光吸收增加速率，來計算γ-GT酶活性。
試驗中所需的儀器和試劑：
可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、粗酶液提取：
細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（10⁴個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；10000rpm 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：稱取約0.1g樣品，加提取液1.0 mL充分研磨，于4℃，10000rpm離心15min，取上清液待測。
血清（漿）：直接檢測。
二、測定步驟：

1. 分光光度計預熱30min以上，調節(jié)波長至405nm，蒸餾水調零。

2. 試劑二置于25℃（一般物種）或者37℃（哺乳動物）水浴中預熱30min以上（保證無沉淀）。

3. 標準管的測定：將標準管成倍稀釋為0.3125、0.15625、0.078、0.039、0.009765、0.0049 、0 mmol/L濃度的對硝基ben胺標準溶液，取0.1mL標準液，加入0.9mL工作液混勻后分別測定其在405nm下的吸光度A標準，記A標準，濃度0記為A空白。計算ΔA標準=A標準-A空白。

4. 樣品測定：

混勻后于405nm測定10s時的吸光度，吹打混勻后測量130s時的吸光度，記為A1和A2。計算ΔA測定=A2-A1。計算ΔA測定=ΔA -ΔA空白管。
三、γ-GT活性計算：

1. 標準曲線的繪制：

以對硝基ben胺濃度為橫坐標，ΔA標準為縱坐標，繪制標準曲線，計算標準方程y=kx+b，將ΔA測定帶入方程得x（mmol/L）。

2. γ-GT活性計算：

（1）按樣本蛋白濃度計算：
活性單位（U）定義：25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分鐘催化產生1mmol對硝基ben胺為一個活性單位。
γ-GT（U/mg prot）=x×V樣÷（Cpr×V樣）÷T=0.5×x÷Cpr。
（2）按樣本鮮重計算：
活性單位（U）定義：25℃或者37℃中，每克組織每分鐘催化產生1mmol對硝基ben胺為一個活性單位。
γ-GT（U/g 鮮重）=x×V樣÷（W÷V提取×V樣）÷T=0.5×x÷W。
（3）按血清（漿）計算：
活性單位（U）定義：25℃或者37℃中，每升血清每分鐘催化產生1mmol對硝基ben胺為一個活性單位。
γ-GT（U/L 血清（漿））=x÷T=0.5×x。
（4）按細菌或培養(yǎng)細胞計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1mmol對硝基ben胺為一個活性單位。
γ-GT（U/10⁴ cell）=x×V樣÷(500×V樣÷V提取) ÷T=0.001×x。
V樣：加入樣品體積，0.1 mL；V提?。杭尤胩崛∫后w積：1mL；T：反應時間，2 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500:500萬細胞。
注意事項：
培養(yǎng)細胞中γ-GT活性測定時，細胞中γ-GT的提取時可加試劑一后研磨或超聲波處理，不能用細胞裂解液處理細胞（防止因為蛋白質變性導致酶失活）。