產(chǎn)品名稱:：γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT)活性檢測(cè)試劑盒 微量法

產(chǎn)品英文名：

產(chǎn)品貨號(hào)：BC1225             產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓

產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣            產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價(jià)格：480
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字：：γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶試劑盒|活性檢測(cè)試劑盒|γ-GT含量檢測(cè)|試劑盒|微量法

簡(jiǎn)要介紹：
γ-GT是γ-谷氨酰循環(huán)中的關(guān)鍵酶，催化GSH降解。γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨?；衔锷系摩?谷氨酰基轉(zhuǎn)移到受體。也可以催化GSH和其他γ-谷氨酰基化合物的水解，產(chǎn)生谷氨酸鹽，在細(xì)胞外谷胱甘肽新陳代謝中起了重要的作用。 
    γ-GT催化谷氨酰對(duì)硝基ben胺中γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移給N-甘氨酰甘氨酸，生成對(duì)硝基ben胺，在405nm有特征光吸收；通過測(cè)定405nm光吸收增加速率，來計(jì)算γ-GT酶活性。  

產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體4.9mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體18.4mL×1瓶，4℃保存。
工作液（在試劑一瓶中配制）：臨用前配制，把試劑二倒入試劑一瓶中，充分溶解（室溫過低時(shí)可以40℃水浴促進(jìn)溶解）；然后把試劑三倒入試劑一瓶中，混勻后室溫保存。
標(biāo)準(zhǔn)液：液體1mL×1支，4℃保存。5mmol/L對(duì)硝基ben胺標(biāo)準(zhǔn)液。
產(chǎn)品說明：
γ-GT是γ-谷氨酰循環(huán)中的關(guān)鍵酶，催化GSH降解。γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨?；衔锷系?/span>γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移到受體。也可以催化GSH和其他γ-谷氨?；衔锏乃猓a(chǎn)生谷氨酸鹽，在細(xì)胞外谷胱甘肽新陳代謝中起了重要的作用。
γ-GT催化谷氨酰對(duì)硝基ben胺中γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移給N-甘氨酰甘氨酸，生成對(duì)硝基ben胺，在405nm有特征光吸收；通過測(cè)定405nm光吸收增加速率，來計(jì)算γ-GT酶活性。
試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、粗酶液提?。?/span>   
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；10000rpm 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
組織：稱取約0.1g樣品，加提取液1.0 mL充分研磨，于4℃，10000rpm離心15min，取上清液待測(cè)。
血清（漿）：直接檢測(cè)。  
二、測(cè)定步驟：

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至405nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 工作液置于25℃（一般物種）或者37℃（哺乳動(dòng)物）水浴中預(yù)熱30min以上（保證無沉淀）。

3. 標(biāo)準(zhǔn)管的測(cè)定：將標(biāo)準(zhǔn)管稀釋為1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078、0.039、0.002、0 mmol/L濃度的對(duì)硝基ben胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，取0.02ml標(biāo)準(zhǔn)液，加入0.18ml工作液混勻后分別測(cè)定其在405nm下的吸光度，記A標(biāo)準(zhǔn)，濃度0記為A空白。計(jì)算ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白。

4. 樣品測(cè)定：

混勻后于405nm測(cè)定10 s時(shí)的吸光度，吹打混勻后測(cè)量130s時(shí)的吸光度，記為A1和A2。計(jì)算ΔA =A2-A1。計(jì)算ΔA測(cè)定=ΔA測(cè)定-ΔA空白管。
三、γ-GT活性計(jì)算：

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：

以對(duì)硝基ben胺濃度為橫坐標(biāo)，ΔA標(biāo)準(zhǔn)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)方程y=kx+b，將ΔA測(cè)定帶入方程得x（mmol/L）。
2、γ-GT活性計(jì)算：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
活性單位（U）定義：25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μmol對(duì)硝基ben胺為一個(gè)活性單位。
γ-GT（U/mg prot）=x×V樣÷（Cpr×V樣）÷T=0.5×x÷Cpr。
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
活性單位（U）定義：25℃或者37℃中，每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1μmol對(duì)硝基ben胺為一個(gè)活性單位。
γ-GT（U/mg 鮮重）=x×V樣÷（W÷V提取×V樣）÷T=0.5×x÷W。
（3）按血清（漿）計(jì)算：
活性單位（U）定義：25℃或者37℃中，每毫升血清每分鐘催化產(chǎn)生1μmol對(duì)硝基ben胺為一個(gè)活性單位。
γ-GT（U/mL 血清（漿））=x×V樣÷V血清（漿）÷T=0.5×x。
（4）按細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞計(jì)算：
    單位的定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1μmol對(duì)硝基ben胺為一個(gè)活性單位。
γ-GT（U/10⁴ cell）=x×V樣÷(500×V樣÷V提取) ÷T=0.001×x。
V樣：加入樣品體積，0.02 mL；V提取：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；V血清（漿）：加入血清（漿）體積，0.02 mL；500：500萬細(xì)胞。
注意事項(xiàng)：
培養(yǎng)細(xì)胞中γ-GT活性測(cè)定時(shí)，細(xì)胞中γ-GT的提取時(shí)可加試劑一后研磨或超聲波處理，不能用細(xì)胞裂解液處理細(xì)胞（防止因?yàn)榈鞍踪|(zhì)變性導(dǎo)致酶失活）。