產(chǎn)品名稱：NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)活性檢測試劑盒

產(chǎn)品英文名： NAD-Malate Dehydrogenase（NAD-MDH）Assay Kit

產(chǎn)品貨號：BC1040               產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓

產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣          產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價(jià)格：360
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字：NAD蘋果酸脫氫酶試劑盒|蘋果酸脫氫酶| NAD-MDH活性檢測|試劑盒

簡要介紹：
MDH （EC 1.1.1.37）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，線粒體中MDH 是TCA循環(huán)的關(guān)鍵酶之一，催化蘋果酸形成草酰乙酸；相反，胞漿中MDH 催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物， 連接多條重要的代謝途徑。因此，MDH 在細(xì)胞多種生理活動(dòng)中扮演著重要的角色，包括線粒體的能量代謝、蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同的輔酶特異性，MDH 分為NAD-依賴的MDH 和NADP-依賴的MDH，細(xì)菌中通常只含有NAD-MDH，在真核細(xì)胞中，NAD-MDH 分布于細(xì)胞質(zhì)和線粒體中。

產(chǎn)品詳細(xì)描述

商品貨號：	商品品牌：	規(guī)格	基本售價(jià)：	選擇規(guī)格
BC1040-50管/48樣	Solarbio	50管/48樣	360.00元

產(chǎn)品內(nèi)容： 
提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 40mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×2 支，-20℃保存；臨用前加入 360μL 雙蒸水，用不完的試劑仍-20℃保存； 試劑三：粉劑×2 支，-20℃保存；臨用前加入 327μL 雙蒸水，用不完的試劑仍-20℃保存。

產(chǎn)品說明： 
MDH（EC 1.1.1.37）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，線粒體中 MDH 是 TCA 循 環(huán)的關(guān)鍵酶之一，催化蘋果酸形成草酰乙酸；相反，胞漿中 MDH 催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰 乙酸是重要的中間產(chǎn)物，連接多條重要的代謝途徑。因此，MDH 在細(xì)胞多種生理活動(dòng)中扮演著重 要的角色，包括線粒體的能量代謝、蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同 的輔酶特異性，MDH分為NAD-依賴的MDH和NADP-依賴的MDH，細(xì)菌中通常只含有NAD-MDH， 在真核細(xì)胞中，NAD-MDH 分布于細(xì)胞質(zhì)和線粒體中。 NAD-MDH 催化 NADH 還原草酰乙酸生成蘋果酸，導(dǎo)致 340nm 處光吸收下降。
需自備的儀器和用品： 紫外分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1 mL 石英比色皿和蒸餾水。

操作步驟： 
一、樣品測定的準(zhǔn)備：
1、 細(xì)菌、細(xì)胞樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，棄上清，按照每 200 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 400μL 提取 液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率 20％，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次），8000g4℃離心 10min， 取上清，置冰上待測。
2、 組織：
稱取約 0.05g 組織，加入 1mL 提取液進(jìn)行冰浴勻漿；8000g 4℃離心 10min，取上清，置 冰上待測。
3、 血清（漿）樣品：直接檢測。
二、測定步驟和加樣表：
紫外分光光度計(jì)提前預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長至 340nm，蒸餾水調(diào)零，試劑一 37℃預(yù)熱 15min。

將上述試劑按順序加入 1 mL 石英比色皿中，充分吸打混勻后立即在 340 nm 波長下記錄初始吸 光度 A1 和反應(yīng) 1min 后的吸光度 A2，盡量保持反應(yīng)溫度為 37℃。計(jì)算ΔA=A1-A2。記錄ΔA 測定、 ΔA 空白。


三、NAD-MDH 活力單位的計(jì)算： 
1、血清（漿）NAD-MDH 活力的計(jì)算
單位的定義：每毫升血清（漿）在反應(yīng)體系中每分鐘消耗 1nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-MDH（U/mL）=(ΔA 測定-ΔA 空白)÷(ε×d）×V 反總÷V 樣本÷T =6430 ×(ΔA 測定-ΔA 空白)
2、組織中 NAD-MDH 活力的計(jì)算:
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘消耗 1nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-MDH（U/mg prot）=(ΔA 測定-ΔA 空白)÷(ε×d）×V 反總÷(V 樣本×Cpr)÷T = 6430 ×(ΔA 測定-ΔA 空白) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘消耗 1nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。 NAD-MDH（U/g 鮮重）=(ΔA 測定-ΔA 空白)÷(ε×d）×V 反總÷(W÷V 提取×V 樣本)÷T =6430×(ΔA 測定-ΔA 空白) ÷W
3 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞中 NAD-MDH 活力的計(jì)算:

1. 按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘消耗 1nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-MDH（U/mg prot）=（ΔA 測定-ΔA 空白）÷（ε×d）×V 反總÷(V 樣本×Cpr)÷T = 6430×(ΔA 測定-ΔA 空白) ÷Cpr

2. 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

單位的定義：每 1 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘消耗 1nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-MDH（U/10 4 cell）=(ΔA 測定-ΔA 空白)÷(ε×d）×V 反總÷(500×V 樣本)÷T =13×(ΔA 測定-ΔA 空白) V 反總：反應(yīng)總體積，0.8mL；V 樣本：加入樣本體積，0.02mL；
ε：NADH 摩爾消光系數(shù)， 6.22×10 -3mL/nmoL/cm；d：比色皿光徑，1cm；T：反應(yīng)時(shí)間，1min；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL； 500：細(xì)菌或細(xì)胞密度，10 4 /mL

注意事項(xiàng)：
1、粗酶液的提取必須在 0℃- 4℃中操做完成，以防止酶變性失活。
2、實(shí)驗(yàn)時(shí)，試劑二、試劑三和樣本在冰上放置，以免變性和失活。
3、當(dāng)初始讀值小于 0.7 或者ΔA 大于 0.5 時(shí)建議稀釋后測量。
4、建議一人加樣一人比色。
5、空白管測 1-2 管即可。