產(chǎn)品名稱：NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)活性檢測試劑盒 微量法

產(chǎn)品英文名：Micro NAD-Malate Dehydrogenase（NAD-MDH）Assay Kit

產(chǎn)品貨號：BC1045               產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓

產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣         產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價(jià)格：700
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字：NAD蘋果酸脫氫酶試劑盒|蘋果酸脫氫酶| NAD-MDH活性檢測|試劑盒|微量法

簡要介紹：
MDH （EC 1.1.1.37）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，線粒體中MDH 是TCA循環(huán)的關(guān)鍵酶之一，催化蘋果酸形成草酰乙酸；相反，胞漿中MDH 催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物， 連接多條重要的代謝途徑。因此，MDH 在細(xì)胞多種生理活動中扮演著重要的角色，包括線粒體的能量代謝、蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同的輔酶特異性，MDH 分為NAD-依賴的MDH 和NADP-依賴的MDH，細(xì)菌中通常只含有NAD-MDH，在真核細(xì)胞中，NAD-MDH 分布于細(xì)胞質(zhì)和線粒體中。

產(chǎn)品詳細(xì)描述

商品貨號：	商品品牌：	規(guī)格	基本售價(jià)：	選擇規(guī)格
BC1045-100管/96樣	Solarbio	100管/96樣	700.00元

產(chǎn)品內(nèi)容： 
試劑一、提取液 100mL×1 瓶，在 4℃保存；
試劑二、液體 20mL×1 瓶，在 4℃保存；
試劑三、粉劑×1 瓶，-20℃保存；
產(chǎn)品說明： 
MDH（EC 1.1.1.37）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，線粒體中 MDH 是 TCA 循 環(huán)的關(guān)鍵酶之一，催化蘋果酸形成草酰乙酸；相反，胞漿中 MDH 催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰 乙酸是重要的中間產(chǎn)物，連接多條重要的代謝途徑。因此，MDH 在細(xì)胞多種生理活動中扮演著重 要的角色，包括線粒體的能量代謝、蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同 的輔酶特異性，MDH分為NAD-依賴的MDH和NADP-依賴的MDH，細(xì)菌中通常只含有NAD-MDH， 在真核細(xì)胞中，NAD-MDH 分布于細(xì)胞質(zhì)和線粒體中。 NAD-MDH 催化 NADH 還原草酰乙酸生成蘋果酸，導(dǎo)致 340nm 處光吸收下降。
需自備的儀器和用品： 紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板和蒸 餾水。
操作步驟： 
一、樣本測定的準(zhǔn)備：
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10 4 個(gè)）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 試劑一），超 聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離 心 10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 試劑一），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
二、測定步驟：
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、檢測工作液的配制：用時(shí)在試劑三中加入 19mL 試劑二和 0.5mL 蒸餾水，充分混勻待用；現(xiàn)配 現(xiàn)用；
3、測定前將檢測工作液在 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴 10min 以上。
4、在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 5μL 樣本和 195μL 工作液，混勻后立即記錄 340nm 處 20s 時(shí)的吸光值 A1 和 1min20s 后的吸光值 A2，計(jì)算ΔA=A1-A2。
注意：若 A1-A2 大于 0.5，需將樣本用提取液稀釋，使 A1-A2 小于 0.5，可提高檢測靈敏度。 計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
三、NAD-MDH 活力單位的計(jì)算：
a. 用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下 
1、血清（漿）NAD-MDH 活力的計(jì)算
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗 1nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-MDH（nmol/min /mL）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷V 樣÷T=6430×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 NAD-MDH 活力的計(jì)算:
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。 NAD-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(V 樣×Cpr) ÷T =6430×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每 g 組織每分鐘消耗 1nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-MDH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T=6430×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每 1 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗 1nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。 NAD-MDH（nmol/min /10 4cell）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷（500×V 樣÷V 樣總）÷T=12.86×ΔA V 反總：反應(yīng)體系總體積，2×10 -4L；
ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×10 3L/mol/cm；d：比色皿光徑， 1cm；V 樣：加入樣本體積，0.005 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min； W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬。

 b. 用 96 孔板測定的計(jì)算公式如下 
1、血清（漿）NAD-MDH 活力的計(jì)算
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗 1nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。 NAD-MDH（nmol/min /mL）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷V 樣÷T=12860×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 NAD-MDH 活力的計(jì)算:
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。 NAD-MDH（nmol/min /mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(V 樣×Cpr) ÷T =12860×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每 g 組織中每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-MDH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T =12860×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每 1 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗 1nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。 NAD-MDH（nmol/min/10 4cell）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷（500×V 樣÷V 樣總）÷T=25.72×ΔA V 反總：反應(yīng)體系總體積，2×10 -4L；
ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×10 3L/mol/cm；d：96 孔板光 徑，0.5cm；V 樣：加入樣本體積，0.005 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬。