產(chǎn)品名稱：NADH氧化酶(NOX)活性檢測(cè)試劑盒  微量法

產(chǎn)品英文名：Micro NADH Oxidase(NOX) Assay Kit

產(chǎn)品貨號(hào)：BC0635              產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓

產(chǎn)品規(guī)格：100管/48樣               產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價(jià)格：1100
庫(kù)存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字：NADH氧化酶試劑盒|活性檢測(cè)試劑盒| NOX活性檢測(cè)|試劑盒|微量法

簡(jiǎn)要介紹：
NOX（EC 1.6.99.3）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，可在氧氣存在下，直接將NADH氧化為NAD。該酶不僅參與NAD的再生，而且與免疫反應(yīng)密切相關(guān)。NOX能夠?qū)ADH氧化為NAD，NADH的氧化與2,6二氯酚靛藍(lán)（DCPIP）的還原相偶聯(lián)，藍(lán)色的DCPIP被還原為無(wú)色的DCPIP，在600nm下測(cè)定藍(lán)色DCPIP的還原速率計(jì)算出NADH氧化酶活性的大小。

產(chǎn)品詳細(xì)描述

商品貨號(hào)：	商品品牌：	規(guī)格	基本售價(jià)：	選擇規(guī)格
BC0635-100管/48樣	Solarbio	100管/48樣	1100.00元

產(chǎn)品內(nèi)容
試劑一：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 1mL×1 瓶，-20℃保存。
試劑四：液體 35mL×1 瓶，4℃保存。
試劑五：液體 5 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑六：粉劑×2 瓶，-20℃保存；臨用前每瓶加入 4.5mL 雙蒸水，用不完的試劑仍-20℃保存。
產(chǎn)品說(shuō)明
NOX（EC 1.6.99.3）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，可在氧氣存在下，直接將 NADH 氧化為 NAD。該酶不僅參與 NAD 的再生，而且與免疫反應(yīng)密切相關(guān)。 NOX 能夠?qū)?NADH 氧化為 NAD，NADH 的氧化與 2,6 二氯酚靛藍(lán)（DCPIP）的還原相偶聯(lián)， 藍(lán)色的 DCPIP 被還原為無(wú)色的 DCPIP，在 600nm 下測(cè)定藍(lán)色 DCPIP 的還原速率計(jì)算出 NADH 氧化 酶活性的大小。
自備儀器和試劑  可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研 缽、冰、蒸餾水
操作步驟
一、樣品測(cè)定的準(zhǔn)備：
1、 組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
2、 準(zhǔn)確稱取 0.1g 組織或收集 500 萬(wàn)細(xì)胞，加入 1mL 試劑一和 10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽 勻漿。
3、 將勻漿 600g，4℃離心 5min。
4、 將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心 10min。
5、 將上清液轉(zhuǎn)移至另一 EP 管中，用于線粒體中泄露 NOX 活性測(cè)定。
6、 沉淀即為線粒體，加入 200uL 試劑二和 2uL 試劑三，用于 NOX 活性測(cè)定。
7、 NOX 總酶活即為上清中 NOX 活性與沉淀中 NOX 活性之和。
 二、測(cè)定步驟和加樣表：
1、可見分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上；
2、試劑四 37℃保溫放置。

將上述試劑按順序在 1mL 玻璃比色皿中操作，加入試劑六后立即混勻，同時(shí)開始計(jì)時(shí)，在 600nm 波長(zhǎng)下記錄 20 秒時(shí)的初始吸光度 A1，迅速將比色皿連同反應(yīng)液一起放入 37℃水浴中，準(zhǔn)確反應(yīng) 1 分鐘。迅速取出比色皿并擦干，記錄 1 分 20 秒時(shí)的吸光度 A2。計(jì)算 ΔA=A1-A2，記錄 A 測(cè)定、A 對(duì)照，ΔA1=ΔA 上清測(cè)定-ΔA 上清對(duì)照，ΔA2=ΔA 沉淀測(cè)定-ΔA 沉淀對(duì)照。
三、NOX 活力單位的計(jì)算： 
（一）用微量玻璃比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
A、上清中 NOX 活力的計(jì)算: 
1、組織中 NOX 活力的計(jì)算：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算： 單位的定義：每 mg 蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個(gè)酶活力單位。 NOX（U/mg prot）=ΔA1÷0.01×V 反總÷(Cpr 上清×V 樣本)=2500×ΔA1÷Cpr 上清
（2）按樣本鮮重計(jì)算： 單位的定義：每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個(gè)酶活力單位。 NOX（U/g 鮮重）=ΔA1÷0.01×V 反總÷(W÷V 提取×V 樣本)=2525×ΔA1÷W
2、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞中 NOX 活力的計(jì)算:
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算： 單位的定義：每 mg 蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個(gè)酶活力單位。 NOX（U/mg prot）=ΔA1÷0.01×V 反總÷(Cpr 上清×V 樣本)=2500×ΔA1÷Cpr 上清
（2）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算： 單位的定義：每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個(gè)酶活力單位。 NOX（U/10 4 cell）=ΔA1÷0.01×V 反總÷(500÷V 提取×V 樣本)=5.05×ΔA1 V 反總：反應(yīng)總體積，0.25mL；V 樣本：加入樣本體積，0.01mL；V 提?。杭尤胩崛∫后w積，1.01mL； Cpr 上清：上清中蛋白濃度，mg/mL；W，樣本鮮重，g；500，細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬(wàn)。
B、沉淀中 NOX 活力的計(jì)算:
 1、組織中 NOX 活力的計(jì)算：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算： 單位的定義：每 mg 蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個(gè)酶活力單位。 NOX（U/mg prot）=ΔA2÷0.01×V 反總÷(Cpr 沉淀×V 樣本)=2500×ΔA2÷Cpr 沉淀
（2）按樣本鮮重計(jì)算： 單位的定義：每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個(gè)酶活力單位。 NOX（U/g 鮮重）=ΔA2÷0.01×V 反總÷(W÷V 樣總×V 樣本)=505×ΔA2÷W
2、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞中 NOX 活力的計(jì)算:
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算： 單位的定義：每 mg 蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個(gè)酶活力單位。 NOX（U/mg prot）=ΔA2÷0.01×V 反總÷(Cpr 沉淀×V 樣本)=2500×ΔA2÷Cpr 沉淀
（2）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算： 單位的定義：每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個(gè)酶活力單位。 NOX（U/10 4 cell）=ΔA2÷0.01×V 反總÷(500÷V 樣總×V 樣本)=1.01×ΔA2 V 反總：反應(yīng)總體積，0.25mL；V 樣本：加入樣本體積，0.01mL；V 樣總：沉淀重懸體積，0.202mL； Cpr 沉淀：沉淀重懸后蛋白濃度，mg/mL；W，樣本鮮重，g；500，細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬(wàn)。
C、樣本 NOX 總活力的計(jì)算: 樣本 NOX 總活力即為上清中 NOX 活力與沉淀中 NOX 活力之和。
1、組織中 NOX 活力的計(jì)算：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算： NOX（U/mg prot）=2500×ΔA1÷Cpr 上清+2500×ΔA2÷Cpr 沉淀
（2）按樣本鮮重計(jì)算： NOX（U/g 鮮重）=2525×ΔA1÷W+505×ΔA2÷W
 2、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞中 NOX 活力的計(jì)算：
 （1）按樣本蛋白濃度計(jì)算： NOX（U/mg prot）=2500×ΔA1÷Cpr 上清+2500×ΔA2÷Cpr 沉淀
（2）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算： 單位的定義：每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個(gè)酶活力單位。 NOX（U/10 4 cell）=5.05×ΔA1+1.01×ΔA2

 （二）用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下 
A、上清中 NOX 活力的計(jì)算:
1、組織中 NOX 活力的計(jì)算：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算： 單位的定義：每 mg 蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.005 定義為一個(gè)酶活力單位。 NOX（U/mg prot）=ΔA1÷0.01×V 反總÷(Cpr 上清×V 樣本)=5000×ΔA1÷Cpr 上清
（2）按樣本鮮重計(jì)算： 單位的定義：每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.005 定義為一個(gè)酶活力單位。 NOX（U/g 鮮重）=ΔA1÷0.01×V 反總÷(W÷V 提取×V 樣本)=5050×ΔA1÷W
2、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞中 NOX 活力的計(jì)算:
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算： 單位的定義：每 mg 蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.005 定義為一個(gè)酶活力單位。 NOX（U/mg prot）=ΔA1÷0.01×V 反總÷(Cpr 上清×V 樣本)=5000×ΔA1÷Cpr 上清
（2）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算： 單位的定義：每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.005 定義為一個(gè)酶活力單位。 NOX（U/10 4 cell）=ΔA1÷0.01×V 反總÷(500÷V 提取×V 樣本)=10.10×ΔA1 V 反總：反應(yīng)總體積，0.25mL；V 樣本：加入樣本體積，0.01mL；V 提取：加入提取液體積，1.01mL； Cpr 上清：上清中蛋白濃度，mg/mL；W，樣本鮮重，g；500，細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬(wàn)。
 B、沉淀中 NOX 活力的計(jì)算:
1、組織中 NOX 活力的計(jì)算：
 （1）按樣本蛋白濃度計(jì)算： 單位的定義：每 mg 蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.005 定義為一個(gè)酶活力單位。 NOX（U/mg prot）=ΔA2÷0.01×V 反總÷(Cpr 沉淀×V 樣本)=5000×ΔA2÷Cpr 沉淀
（2）按樣本鮮重計(jì)算： 單位的定義：每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.005 定義為一個(gè)酶活力單位。 NOX（U/g 鮮重）=ΔA2÷0.01×V 反總÷(W÷V 樣總×V 樣本)=1010×ΔA2÷W
2、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞中 NOX 活力的計(jì)算：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算： 單位的定義：每 mg 蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.005 定義為一個(gè)酶活力單位。 NOX（U/mg prot）=ΔA2÷0.01×V 反總÷(Cpr 沉淀×V 樣本)=5000×ΔA2÷Cpr 沉淀
（2）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算： 單位的定義：每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.005 定義為一個(gè)酶活力單位。 NOX（U/10 4 cell）=ΔA2÷0.01×V 反總÷(500÷V 樣總×V 樣本)=2.02×ΔA2 V 反總：反應(yīng)總體積，0.25mL；V 樣本：加入樣本體積，0.01mL；V 樣總：沉淀重懸體積，0.202mL； Cpr 沉淀：沉淀重懸后蛋白濃度，mg/mL；W，樣本鮮重，g；500，細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬(wàn)。
C、樣本 NOX 總活力的計(jì)算: 樣本 NOX 總活力即為上清中 NOX 活力與沉淀中 NOX 活力之和。
1、組織中 NOX 活力的計(jì)算：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算： NOX（U/mg prot）=5000×ΔA1÷Cpr 上清+5000×ΔA2÷Cpr 沉淀
（2）按樣本鮮重計(jì)算： NOX（U/g 鮮重）=5050×ΔA1÷W+1010×ΔA2÷W
2、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞中 NOX 活力的計(jì)算:
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算： NOX（U/mg prot）=5000×ΔA1÷Cpr 上清+5000×ΔA2÷Cpr 沉淀
（2）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算： 單位的定義：每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.005 定義為一個(gè)酶活力單位。 NOX（U/10 4 cell）=5.05×ΔA1+1.01×ΔA2
注意事項(xiàng)：
1、粗酶液的提取必須在 0℃- 4℃中操做完成，以防止酶變性失活。
2、比色皿中反應(yīng)液的溫度*保持 37℃，取小燒杯一只裝入一定量的 37℃蒸餾水，將此燒杯放入 37℃水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。
3、*兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn)，一個(gè)人比色，一個(gè)人計(jì)時(shí)，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
4、實(shí)驗(yàn)時(shí)，試劑六樣本在冰上放置，以免變性和失活。
5、因通過反應(yīng)速率計(jì)算酶活，使用 96 孔板時(shí)請(qǐng)根據(jù)操作速度控制一次測(cè)定的樣本數(shù)量。

相關(guān)文獻(xiàn)：

《Identification and characterization of GmMYB118 responses to drought and salt stress》 作者:Yong-Tao Du, Meng-Jie Zhao, Chang-Tao Wang, Yuan Gao, Yan-Xia Wang, Yong-Wei Liu, Ming Chen, Jun Chen, Yong-Bin Zhou, Zhao-Shi Xu & You-Zhi Ma  期刊:BMC Plant Biology 影響因子:3.67 PMID:30509166
《A combinational optimization method for efficient synthesis of tetramethylpyrazine by the recombinant Escherichia coli》 作者:Youqiang Xu，Chunyan Xu，Xiuting Li，Baoguo Sun，Ahmed Alaa Eldin，Yingmin Jia 期刊:Biochemical Engineering Journal 影響因子:3.371 PMID:
《Antioxidant and antihyperlipidemic activities of purified polysaccharides from Ulva pertusa》 作者:Weida Li,Kai Wang,Nanfang Jiang,Xiaolei Liu,Minghui Wan, Xintao Chang, Dongmei Liu, Huimin Qi,Shunmei Liu 期刊:Journal of Applied Phycology 影響因子:4.784 PMID:29476858