產(chǎn)品名稱：6-磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)活性檢測試劑盒 微量法

產(chǎn)品英文名： Micro 6-phosphate Dehydrogenase（G6PDH）Assay Kit 

產(chǎn)品貨號：BC0265          產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓

產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣        產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：380
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字:葡萄糖脫氫酶試劑盒|活性檢測試劑盒| G6PDH活性檢測|試劑盒|微量法

簡要介紹：
G6PDH廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是磷酸戊糖途徑的關(guān)鍵酶，催化 6-磷酸葡萄糖氧化為 6 -磷酸葡萄糖酸內(nèi)酯，同時將NADP+還原為NADPH，供生物合成及維持細(xì)胞內(nèi)的還原狀態(tài)用。因此6-磷酸葡萄糖脫氫酶活性的高低可以從一定程度上反映出生物體的生物合成和抗氧化能力。
  G6PDH催化NADP+還原生成NADPH，在340nm下測定NADPH增加速率。

產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品簡介： 
G6PDH 廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是磷酸戊糖途徑的關(guān)鍵酶，催化 6-磷 酸葡萄糖氧化為 6 -磷酸葡萄糖酸內(nèi)酯，同時將 NADP +還原為 NADPH，供生物合成及維持細(xì)胞內(nèi) 的還原狀態(tài)用。因此 6-磷酸葡萄糖脫氫酶活性的高低可以從一定程度上反映出生物體的生物合成和 抗氧化能力。G6PDH 催化 NADP +還原生成 NADPH，在 340 nm 下測定 NADPH 增加速率。

試驗中所需的儀器和試劑： 紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研 缽、冰和蒸餾水。

產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 20 mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃保存；

操作步驟： 

• 樣品測定的準(zhǔn)備：

1. 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：

收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清，按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10 4個）： 提取液體積（ml）為 500~1000:1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1ml 提取液），超聲波破碎細(xì) 菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次），8000g 4℃離心 10min，取 上清，置冰上待測。

2. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（ml）為 1:5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

3. 血清（漿）樣品：直接檢測。

• 測定操作：

1. 分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 340nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 檢測工作液的配制：用時在試劑二中加入 18mL 試劑一和 1mL 蒸餾水，充分混勻待用；現(xiàn)配現(xiàn) 用。

3. 測定前將檢測工作液在 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴 10min 以上。

4、 在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 樣本和 190μL 工作液，混勻后立即記錄 340nm 處 1min 后吸光值 A1 和 6min 后的吸光值 A2，計算ΔA=A2-A1。


注意事項： 
若ΔA 大于 0.5，需將酶液用提取液稀釋，計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)?；?qū)⒎磻?yīng)時間縮短至 2min，使 A2-A1 小于 0.5，可提高檢測靈敏度。

G6PDH 

1. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1. 血清（漿）G6PDH 活力的計算:

單位的定義：每 ml 血清（漿）每分鐘生成 1 nmol 的 NADPH 定義為一個酶活力單位。
G6PDH（U/ml）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷V 樣÷T=643×ΔA

2. 組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 G6PDH 活力計算：

1. 按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘生成 1 nmol 的 NADPH 定義為一個酶活力單位。
G6PDH（U/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(V 樣×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr

2. 按樣本鮮重計算

單位的定義：每 g 組織每分鐘生成 1 nmol 的 NADPH 定義為一個酶活力單位。
G6PDH（U/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(W ×V 樣÷V 樣總)÷T=643×ΔA÷W

3. 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算

單位的定義：每 1 萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成 1 nmol 的 NADPH 定義為一個酶活力單位。
G6PDH（U/10 4 cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=1.286×ΔA V 反總：反應(yīng)體系總體積，2×10 -4 L；
ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×10 3 L / mol /cm；d：比色 皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.01 ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時間，5 min； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬。

2. 用 96 孔板測定的計算公式如下 

1. 血清（漿）G6PDH 活力的計算:

單位的定義：每 ml 血清（漿）每分鐘生成 1 nmol 的 NADPH 定義為一個酶活力單位。
G6PDH（U/ml）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷V 樣÷T=1286×ΔA

2. 組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 G6PDH 活力計算：

1. 按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘生成 1 nmol 的 NADPH 定義為一個酶活力單位。
G6PDH（U/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1286×ΔA÷Cpr

2. 按樣本鮮重計算

單位的定義：每 g 組織每分鐘生成 1 nmol 的 NADPH 定義為一個酶活力單位。
G6PDH（U/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(W ×V 樣÷V 樣總)÷T=1286×ΔA÷W

3. 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算

單位的定義：每 1 萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成 1 nmol 的 NADPH 定義為一個酶活力單位。
G6PDH（U/10 4 cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=2.572×ΔA V 反總：反應(yīng)體系總體積，2×10 -4 L；
ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×10 3 L / mol /cm；d：比色 皿光徑，0.5cm；V 樣：加入樣本體積，0.01 ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬。