產(chǎn)品名稱：胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)活性檢測試劑盒 微量法
產(chǎn)品英文名：Micro Cytoplasmic Citric Acid Dehydrogenase(ICDHc) Assay Kit
產(chǎn)品貨號：BC0405            產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣          產(chǎn)品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：640
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字：胞漿異檸檬酸脫氫酶試劑盒|活性檢測試劑盒|ICDHc活性檢測|微量法

簡要介紹：
ICDHc（EC 1.1.1.42）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，催化異檸檬酸脫氫脫羧 生成 α-酮戊二酸，同時還原 NADP+生成 NADPH。ICDHc 是細胞質(zhì)中除了磷酸戊糖途徑外又一種 NADPH 重要來源，在逆境中該酶活性通常會發(fā)生顯著變化。 利用 ICDHc 催化 NADP+還原成 NADPH 反應(yīng)，在 340 nm 下測定 NADPH 濃度的增加。
產(chǎn)品詳細描述

產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：120mL×1 瓶，4℃保存； 
試劑一：粉劑×1 瓶，4℃保存；用時加入 20 mL 提取液溶解； 
試劑二：粉劑×1 支，4℃保存；用時每支加 275μL 雙蒸水充分溶解備用； 
試劑三：粉劑×1 支，-20℃保存；用時每支加 275μL 雙蒸水充分溶解備用；
產(chǎn)品說明：
   ICDHc（EC 1.1.1.42）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，催化異檸檬酸脫氫脫羧 生成 α-酮戊二酸，同時還原 NADP+生成 NADPH。ICDHc 是細胞質(zhì)中除了磷酸戊糖途徑外又一種 NADPH 重要來源，在逆境中該酶活性通常會發(fā)生顯著變化。 利用 ICDHc 催化 NADP+還原成 NADPH 反應(yīng)，在 340 nm 下測定 NADPH 濃度的增加。   

自備儀器和用品
紫外分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/石英 96 孔板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟
樣本的前處理： 
細菌、細胞或組織樣品的制備： 
細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每 200 萬細菌或細胞加 入 400μL 提取液，超聲波破碎細菌或細胞（功率 20％，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃ 離心 10min，取上清，置冰上待測。 組織：稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置 冰上待測。 
血清（漿）樣品：直接檢測。 
 
測定步驟： 
分光光度計預(yù)熱 30min 以上，蒸餾水調(diào)零。 
工作液配制：將試劑一、試劑二、試劑三按 85：1：1 的比例混合。 
按下表步驟加樣： 
試劑名稱（μL）
測定管
工作液（μL）
190
 樣本（μL）
10
將上述試劑按順序加入 1 mL 石英比色皿中，加樣本的同時開始計時，在 340 nm 波長下記錄 20 秒時的初始吸光度 A1；迅速將比色皿連同反應(yīng)液一起放入 37℃水浴中，準確反應(yīng) 2 分鐘；迅速取出比色皿并擦干，記錄 2 分 20 秒時的吸光度 A2。計算 ΔA=A2-A1。
注意事項： 
若 A2-A1 大于 0.5，需將酶液用提取液稀釋，使 A2-A1 小于 0.5，可提高檢測靈敏度。若初始值 A1 大于 0.5 可嘗試將酶液用提取液稀釋。 
實驗時，試劑二、試劑三和樣本在冰上放置，以免變性和失活；工作液 37℃水浴放置。 
比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持 37℃，取小燒杯一只裝入一定量的 37℃蒸餾水，將此燒杯放入 37℃水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。 
*兩個人同時做此實驗，一個人比色，一個人計時，以保證實驗結(jié)果的準確性。 
 
ICDHc 活力單位的計算： 
按微量石英比色皿計算： 
血清（漿）ICDHc 活力的計算: 
單位的定義：每升血清（漿）在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1 μmol NADPH 定義為一個酶活力單位。 
ICDHc（U/L）＝[ΔA×V 反總÷(ε×d)×106 ]÷V 樣本÷T=1608×ΔA 
組織中 ICDHc 活力的計算: 
按樣本蛋白濃度計算： 
單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個酶活力單位。 
ICDHc（U/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109 ]÷(V 樣本×Cpr)÷T=1608×ΔA÷Cpr 
按樣本鮮重計算： 
單位的定義：每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個酶活力單位。 
ICDHc（U/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109 ]÷(W÷V 提取×V 樣本) ÷T=1608×ΔA÷W
細菌或培養(yǎng)細胞中 ICDHc 活力的計算: 
按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個酶活力單位。 
ICDHc（U/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109 ]÷(V 樣本×Cpr)÷T=1608×ΔA÷Cpr 
按細菌或細胞密度計算： 
單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1 nmol 的 NADPH 定義為一個酶活力單 位。
 ICDHc（U/104 Cell）＝[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109 ]÷(V 樣本×500)÷T=3.2×ΔA÷Cpr
V 反總：反應(yīng)總體積，2×10-4 L；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L/moL/cm；d：石英比色 皿光徑，1cm；V 樣本：加入樣本體積，0.01mL；V 提取：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白 濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；T：反應(yīng)時間，2min；500：細菌或細胞密度，104 個/mL。

 b、按石英 96 孔板計算： 將上述公式中光徑 d-96 孔板光徑改為 0.5cm。