產(chǎn)品名稱: 二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)活性檢測試劑盒 微量法

產(chǎn)品英文名: Micro Rubisco-bisphosphate carboxylase/oxygenase （Rubisco）Assay Kit

產(chǎn)品貨號：BC0445           產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓

產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣        產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：6000
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字:   二磷酸核酮糖羧化酶檢測試劑盒|加氧酶檢測試劑盒|Rubisco檢測試劑盒|二磷酸核酮糖羧化酶|加氧酶|試劑盒

簡要介紹：
核酮糖-1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶（Rubisco, EC 4.1.1.39）是植物光合作用中的一個關(guān)鍵酶，既控制著CO2的固定，同時又制約著碳素向Calvin循環(huán)和光呼吸循環(huán)分流，其活性的大小直接影響著光合速率。

產(chǎn)品詳細描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體25mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；
試劑三：粉劑×1支，-20℃保存；臨用前加入1mL雙蒸水充分溶解待用；
試劑四：粉劑×1支，-20℃保存；臨用前加入1mL雙蒸水充分溶解待用；
產(chǎn)品說明：
1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶（Rubisco, EC 4.1.1.39）是植物光合作用中的一個關(guān)鍵酶，既控制著CO₂的固定，同時又制約著碳素向Calvin循環(huán)和光呼吸循環(huán)分流，其活性的大小直接影響著光合速率。
在Rubisco的催化下，1分子的核酮糖-1，5-二磷酸（RuBP）與1分子的CO₂結(jié)合，產(chǎn)生2分子的3-磷酸甘油酸（PGA）；（2）PGA可通過外加的3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脫氫酶的作用，產(chǎn)生甘油醛-3-磷酸，伴隨著NADH氧化生成NAD⁺；（3）在340 nm NADH有特征吸收峰，而NAD⁺沒有此吸收峰，因此測定340nm吸光度下降速率可以代表Rubisco的羧化酶活性。
自備實驗用品及儀器
紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/ 96孔UV板、研缽、冰和蒸餾水。

操作步驟：
一、粗酶液制備：
1、細菌或細胞樣品的制備：收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每500萬細菌或細胞加入1mL提取液，超聲波破碎細菌或細胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、稱取約0.1g組織加入1mL提取液，冰浴中勻漿。10000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。建議選取新鮮的植物樣本。
二、測定步驟：

1. 紫外分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 工作液的配制：臨用前在試劑二中加入全部試劑一，充分混勻，在 25℃孵育5min。

3. 按下表步驟加樣：

記錄340nm處20s時吸光值A1和5min20s時的吸光值A2，計算ΔA測定=A1測定-A2測定，ΔA空白=A1空白-A2空白，ΔA =ΔA測定-ΔA空白。反應(yīng)溫度保持在25℃。空白管只做1-2管。
三、Rubisco活性計算：
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下：
1、按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1 nmolNADH為一個酶活力單位。
Rubisco活力（U/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(Cpr×V樣) ÷T =344×ΔA÷Cpr
此法需要測定粗酶液中蛋白質(zhì)濃度，建議選購本公司生產(chǎn)的BCA蛋白質(zhì)濃度測定試劑盒。
2、按樣本鮮重計算
單位的定義：25℃中每g組織1 min氧化1 nmolNADH為一個酶活力單位。
Rubisco活力（U/g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V樣÷V樣總×W) ÷T=344×ΔA÷W
3、按細菌或細胞數(shù)量計算
單位的定義：25℃中每1萬個細菌或細胞1 min氧化1 nmolNADH為一個酶活力單位。
Rubisco活力（U/10⁴ cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V樣÷V樣總×500) ÷T=0.69×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2.14×10^-4L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×10³L/ mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.02 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，5 min；W：樣品質(zhì)量，g；500：細胞或細菌總數(shù)，500萬。
b.使用96孔板測定的計算公式如下：
將上述公式中光徑d-96孔板光徑改為0.6cm進行計算。