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產(chǎn)品展廳
丙酮酸脫羧酶(PDC)活性檢測試劑盒 紫外分光光度法 BC1070
  • 品牌:Solarbio
  • 產(chǎn)地:北京
  • 貨號:BC1070
  • 發(fā)布日期: 2019-12-06
  • 更新日期: 2025-07-07
產(chǎn)品詳請
產(chǎn)地 北京
品牌 Solarbio
貨號 BC1070
用途
英文名稱 Pyruvate decarboxylase (PDC) activity assay kit
包裝規(guī)格
純度 %
CAS編號
保質(zhì)期 1年
是否進口

產(chǎn)品名稱: 丙酮酸脫羧酶(PDC)活性檢測試劑盒

產(chǎn)品英文名: Pyruvate Decarboxylase (PDC) Assay Kit

產(chǎn)品貨號:BC1070         產(chǎn)地:北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓

產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣      產(chǎn)品商標(biāo):solarbio

保存與運輸:4℃保存或-20℃保存;            參考價格:1400

庫存狀態(tài):現(xiàn)貨                          

關(guān)鍵字:   丙酮酸脫羧酶檢測試劑盒|PDC檢測試劑盒| 丙酮酸脫羧酶|試劑盒

 

簡要介紹:

PDC主要存在于酵母中,是乙醇發(fā)酵的關(guān)鍵酶之一,催化丙酮酸脫羧生成乙醛。

PDC催化丙酮酸脫羧生成乙醛,添加乙醇脫氫酶(ADH)來進一步催化 NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+;NADH340 nm有吸收峰,而NAD+沒有;通過測定340 nm光吸收下降速率,來計算PDC活性。

 

 

產(chǎn)品詳細描述

產(chǎn)品內(nèi)容

提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存。

試劑一:液體36mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體20mL×1瓶,4℃保存。

試劑三:粉劑×1瓶,﹣20℃保存。

試劑四:粉劑×1瓶,﹣20℃保存。

混合試劑:臨用前配制,將試劑三和試劑四用適量試劑溶解后再全部轉(zhuǎn)移到試劑中備用。

試劑五:液體5mL×1瓶,4℃保存。

 

產(chǎn)品說明

PDC主要存在于酵母中,是乙醇發(fā)酵的關(guān)鍵酶之一,催化丙酮酸脫羧生成乙醛。

PDC催化丙酮酸脫羧生成乙醛,添加乙醇脫氫酶(ADH)來進一步催化 NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+;NADH340 nm有吸收峰,而NAD+沒有;通過測定340 nm光吸收下降速率,來計算PDC活性。

 

自備儀器和用品:

    臺式離心機、紫外分光光度計、水浴鍋、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

 

操作步驟:

一、粗酶液提?。?/span>   

1、細胞或微生物樣品的制備:

先收集細胞或微生物樣品到離心管內(nèi),棄上清,按照每500萬細胞或微生物加入1mL提取液,超聲波破碎細菌或細胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次)。10000rpm,4℃離心20min,取上清,置冰上待測。

2、組織樣品:

稱取約0.1g組織,加入1mL提取液,冰上充分研磨。16000g  4℃離心20min,取上清,置冰上待測。

3、血清(漿)樣品:直接檢測。

二、測定步驟:

1、 紫外分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。

2、 試劑一37℃(哺乳動物)或25℃(其他物種)水浴提前預(yù)熱30min。

3、 操作表:

試劑名稱(μL

測定管

空白管

試劑一

700

700

試劑五

100

100

混合試劑

100

100

樣本

100

-

蒸餾水

-

100

    迅速混勻后于340nm比色,記錄10s70s的吸光值,測定管的記為A1A2,空白管的記為A3A4,計算ΔA=A1-A2-A3-A4)。空白管只需做1-2次。

三、PDC活性計算:

1、血清(漿)PCD活力的計算:

單位的定義:37℃(哺乳動物)或25℃(其他物種)中,每毫升血清(漿)在反應(yīng)體系中每分鐘催化1 μmol NADH氧化定義為一個酶活力單位。

PDCU/mL= [(A3-A4)-(A1-A2)]×V反總÷(ε×d)×106÷V樣本÷T=1.6×[(A3-A4)-(A1-A2)]。

2、 組織中PDC活力的計算:

1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:37℃(哺乳動物)或25℃(其他物種)中,每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化1μmol NADH氧化定義為一個酶活力單位。

PDCU/mg prot=[(A3-A4)-(A1-A2)]×V反總÷(ε×d)×106÷(V樣本×Cpr)÷T

=1.6×[(A3-A4)-(A1-A2)] ÷Cpr

2)按樣本鮮重計算:

單位的定義:37℃(哺乳動物)或25℃(其他物種)中,每g組織鮮重在反應(yīng)體系中每分鐘催化1μmol NADH氧化定義為一個酶活力單位。

PDCU/g 鮮重)=[(A3-A4)-(A1-A2)]×V反總÷(ε×d)×106÷ (W÷V提取×V樣本)÷T

=1.6×[(A3-A4)-(A1-A2)] ÷W。

3、細菌或培養(yǎng)細胞中PDC活力的計算:

按細菌或細胞密度計算:

單位的定義:37℃(哺乳動物)或25℃(其他物種)中,每1萬個細菌或細胞在反應(yīng)體系中每分鐘催化1μmolNADH氧化定義為一個酶活力單位。

PDCU/104 Cell=[(A3-A4)-(A1-A2)]×V反總÷(ε×d)×106÷(V樣本÷V提取×500)÷T

                 =3.2×10-3×ΔA÷Cpr

εNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol/cmd:比色皿光徑,1cm;V總:反應(yīng)體系總體積,1mL=0.001 L,V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,0.1mL;Cpr:蛋白濃度(mg/mL),需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量試劑盒;T:反應(yīng)時間,1 min;W:樣本鮮重,gV提?。禾崛∫后w積,1mL500:細菌或細胞總數(shù),500萬個細胞。

注意事項:

1、實驗時,混合試劑、試劑五和樣本在冰上放置,以免變性和失活。

2、比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃25℃,取小燒杯一只裝入一定量的37℃25℃蒸餾水,將此燒杯放入37℃25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。

3、*兩個人同時做此實驗,一個人比色,一個人計時,以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。

4、如果1分鐘變化值較小可延長反應(yīng)時間,同時注意修改計算公式。

 

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