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產(chǎn)地 | 北京 |
品牌 | Solarbio |
貨號 | BC1070 |
用途 | |
英文名稱 | Pyruvate decarboxylase (PDC) activity assay kit |
包裝規(guī)格 | |
純度 | % |
CAS編號 | |
保質(zhì)期 | 1年 |
是否進口 |
產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣 產(chǎn)品商標(biāo):solarbio
保存與運輸:4℃保存或-20℃保存; 參考價格:1400
庫存狀態(tài):現(xiàn)貨
關(guān)鍵字: : 丙酮酸脫羧酶檢測試劑盒|PDC檢測試劑盒| 丙酮酸脫羧酶|試劑盒
簡要介紹:
PDC主要存在于酵母中,是乙醇發(fā)酵的關(guān)鍵酶之一,催化丙酮酸脫羧生成乙醛。
PDC催化丙酮酸脫羧生成乙醛,添加乙醇脫氫酶(ADH)來進一步催化 NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+;NADH在340 nm有吸收峰,而NAD+沒有;通過測定340 nm光吸收下降速率,來計算PDC活性。
產(chǎn)品詳細描述
產(chǎn)品內(nèi)容:
提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體36mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體20mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1瓶,﹣20℃保存。
試劑四:粉劑×1瓶,﹣20℃保存。
混合試劑:臨用前配制,將試劑三和試劑四用適量試劑二溶解后再全部轉(zhuǎn)移到試劑二中備用。
試劑五:液體5mL×1瓶,4℃保存。
產(chǎn)品說明:
PDC主要存在于酵母中,是乙醇發(fā)酵的關(guān)鍵酶之一,催化丙酮酸脫羧生成乙醛。
PDC催化丙酮酸脫羧生成乙醛,添加乙醇脫氫酶(ADH)來進一步催化 NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+;NADH在340 nm有吸收峰,而NAD+沒有;通過測定340 nm光吸收下降速率,來計算PDC活性。
自備儀器和用品:
臺式離心機、紫外分光光度計、水浴鍋、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、粗酶液提?。?/span>
1、細胞或微生物樣品的制備:
先收集細胞或微生物樣品到離心管內(nèi),棄上清,按照每500萬細胞或微生物加入1mL提取液,超聲波破碎細菌或細胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次)。10000rpm,4℃離心20min,取上清,置冰上待測。
2、組織樣品:
稱取約0.1g組織,加入1mL提取液,冰上充分研磨。16000g 4℃離心20min,取上清,置冰上待測。
3、血清(漿)樣品:直接檢測。
二、測定步驟:
1、 紫外分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 試劑一37℃(哺乳動物)或25℃(其他物種)水浴提前預(yù)熱30min。
3、 操作表:
試劑名稱(μL) | 測定管 | 空白管 |
試劑一 | 700 | 700 |
試劑五 | 100 | 100 |
混合試劑 | 100 | 100 |
樣本 | 100 | - |
蒸餾水 | - | 100 |
迅速混勻后于340nm比色,記錄10s和70s的吸光值,測定管的記為A1和A2,空白管的記為A3和A4,計算ΔA=(A1-A2)-(A3-A4)。空白管只需做1-2次。
三、PDC活性計算:
1、血清(漿)PCD活力的計算:
單位的定義:37℃(哺乳動物)或25℃(其他物種)中,每毫升血清(漿)在反應(yīng)體系中每分鐘催化1 μmol NADH氧化定義為一個酶活力單位。
PDC(U/mL)= [(A3-A4)-(A1-A2)]×V反總÷(ε×d)×106÷V樣本÷T=1.6×[(A3-A4)-(A1-A2)]。
2、 組織中PDC活力的計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:37℃(哺乳動物)或25℃(其他物種)中,每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化1μmol NADH氧化定義為一個酶活力單位。
PDC(U/mg prot)=[(A3-A4)-(A1-A2)]×V反總÷(ε×d)×106÷(V樣本×Cpr)÷T
=1.6×[(A3-A4)-(A1-A2)] ÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算:
單位的定義:37℃(哺乳動物)或25℃(其他物種)中,每g組織鮮重在反應(yīng)體系中每分鐘催化1μmol NADH氧化定義為一個酶活力單位。
PDC(U/g 鮮重)=[(A3-A4)-(A1-A2)]×V反總÷(ε×d)×106÷ (W÷V提取×V樣本)÷T
=1.6×[(A3-A4)-(A1-A2)] ÷W。
3、細菌或培養(yǎng)細胞中PDC活力的計算:
按細菌或細胞密度計算:
單位的定義:37℃(哺乳動物)或25℃(其他物種)中,每1萬個細菌或細胞在反應(yīng)體系中每分鐘催化1μmol的NADH氧化定義為一個酶活力單位。
PDC(U/104 Cell)=[(A3-A4)-(A1-A2)]×V反總÷(ε×d)×106÷(V樣本÷V提取×500)÷T
=3.2×10-3×ΔA÷Cpr
ε:NADH摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V總:反應(yīng)體系總體積,1mL=0.001 L,V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,0.1mL;Cpr:蛋白濃度(mg/mL),需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量試劑盒;T:反應(yīng)時間,1 min;W:樣本鮮重,g;V提?。禾崛∫后w積,1mL;500:細菌或細胞總數(shù),500萬個細胞。
注意事項:
1、實驗時,混合試劑、試劑五和樣本在冰上放置,以免變性和失活。
2、比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃或25℃,取小燒杯一只裝入一定量的37℃或25℃蒸餾水,將此燒杯放入37℃或25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。
3、*兩個人同時做此實驗,一個人比色,一個人計時,以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。
4、如果1分鐘變化值較小可延長反應(yīng)時間,同時注意修改計算公式。
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