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| 產地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號 | BC1075 |
| 用途 | |
| 英文名稱 | Pyruvate decarboxylase (PDC) activity assay kit |
| 包裝規(guī)格 | |
| 純度 | % |
| CAS編號 | |
| 保質期 | 1年 |
| 是否進口 |
產品規(guī)格：100管/96樣 產品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存； 參考價格：1660
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨
關鍵字: ： 丙酮酸脫羧酶檢測試劑盒|PDC檢測試劑盒| 丙酮酸脫羧酶|試劑盒
簡要介紹：
PDC主要存在于酵母中，是乙醇發(fā)酵的關鍵酶之一，催化丙酮酸脫羧生成乙醛。
PDC催化丙酮酸脫羧生成乙醛，添加乙醇脫氫酶（ADH）來進一步催化 NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+；NADH在340 nm有吸收峰，而NAD+沒有；通過測定340 nm光吸收下降速率，來計算PDC活性。
產品詳細描述
產品內容：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體18mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體20mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1瓶，-20℃保存。
試劑四：粉劑×1瓶，-20℃保存。
混合試劑：臨用前配制，將試劑三和試劑四用適量試劑二溶解后再全部轉移到試劑二中備用。
試劑五：液體2mL×1瓶，4℃保存。
產品說明：
PDC主要存在于酵母中，是乙醇發(fā)酵的關鍵酶之一，催化丙酮酸脫羧生成乙醛。
PDC催化丙酮酸脫羧生成乙醛，添加乙醇脫氫酶（ADH）來進一步催化 NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+；NADH在340 nm有吸收峰，而NAD+沒有；通過測定340 nm光吸收下降速率，來計算PDC活性。
自備儀器和用品：
臺式離心機、紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋、微量石英比色皿/ 96孔（UV板）、可調式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、粗酶液提取：
1、細胞或微生物樣品的制備：
先收集細胞或微生物樣品到離心管內，棄上清，按照每500萬細胞或微生物加入1mL提取液，超聲波破碎細菌或細胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復30次）。10000rpm，4℃離心20min，取上清，置冰上待測。
2、組織樣品：
稱取約0.1g組織，加入1mL提取液，冰上充分研磨。16000g 4℃離心20min，取上清，置冰上待測。
3、血清（漿）樣品：直接檢測。
二、測定步驟：
1、 紫外分光光度計預熱30min以上，調節(jié)波長至340nm，蒸餾水調零。
2、 試劑一37℃（哺乳動物）或25℃（其他物種）水浴提前預熱30min。
3、 操作表：
試劑名稱（μL） | 測定管 | 空白管 |
試劑一 | 140 | 140 |
試劑五 | 20 | 20 |
混合試劑 | 20 | 20 |
樣本 | 20 | - |
蒸餾水 | - | 20 |
迅速混勻后于340nm比色，記錄10s和70s的吸光值，測定管的記為A1和A2，空白管的記為A3和A4，計算ΔA=（A1-A2）-（A3-A4）。空白管只需做1-2次。
三、PDC活性計算：
A.使用微量石英比色皿測定的計算：
1、血清（漿）PCD活力的計算：
單位的定義：37℃（哺乳動物）或25℃（其他物種）中，每毫升血清（漿）在反應體系中每分鐘催化1 μmol NADH氧化定義為一個酶活力單位。
PDC（U/mL）= [(A3-A4)-(A1-A2)]×V反總÷(ε×d)×106÷V樣本÷T=1.6×[(A3-A4)-(A1-A2)]。
2、 組織中PDC活力的計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：37℃（哺乳動物）或25℃（其他物種）中，每mg組織蛋白在反應體系中每分鐘催化1μmol NADH氧化定義為一個酶活力單位。
PDC（U/mg prot）=[(A3-A4)-(A1-A2)]×V反總÷(ε×d)×106÷(V樣本×Cpr)÷T
=1.6×[(A3-A4)-(A1-A2)] ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：37℃（哺乳動物）或25℃（其他物種）中，每g組織鮮重在反應體系中每分鐘催化1μmol NADH氧化定義為一個酶活力單位。
PDC（U/g 鮮重）= [(A3-A4)-(A1-A2)]×V反總÷(ε×d)×106÷ (W÷V提取×V樣本)÷T
=1.6×[(A3-A4)-(A1-A2)] ÷W。
3、細菌或培養(yǎng)細胞中PDC活力的計算：
按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：37℃（哺乳動物）或25℃（其他物種）中，每1萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘催化1μmol的NADH氧化定義為一個酶活力單位。
PDC（U/104 Cell）= [(A3-A4)-(A1-A2)]×V反總÷(ε×d)×106÷(V樣本÷V提取×500)÷T
=3.2×10-3×ΔA÷Cpr
ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V總：反應體系總體積， 0.2mL=2×10-4 L，V樣：加入反應體系中上清液體積，0.02mL；Cpr：蛋白濃度（mg/mL），需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質含量試劑盒；T：反應時間，1 min；W：樣本鮮重，g；V提?。禾崛∫后w積，1mL；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬個細胞。
B.使用96孔UV板測定的計算：
將上述公式中的d-1cm（比色皿光徑） 換為d-0.6cm（96孔板光徑） 進行計算即可。
注意事項：
1、實驗時，混合試劑、試劑五和樣本在冰上放置，以免變性和失活。
2、比色皿中反應液的溫度必須保持37℃或25℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃或25℃蒸餾水，將此燒杯放入37℃或25℃水浴鍋中。在反應過程中把比色皿連同反應液放在此燒杯中。
3、*兩個人同時做此實驗，一個人比色，一個人計時，以保證實驗結果的準確性。
4、如果1分鐘變化值較小可延長反應時間，同時注意修改計算公式。
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