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中性木聚糖酶(NEX)活性檢測試劑盒說明書
微量法

產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓
產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
貨號: BC2595
規(guī)格: 100T/48S
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            
參考價格：860
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨


產(chǎn)品內(nèi)容：
緩沖液：液體60mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體5mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體8mL×1 瓶，4℃避光保存
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1 支，10mg 木糖，臨用前加入667μL 蒸餾水配成100μmol/mL 的標(biāo)品溶液，再稀釋25 倍即得4μmol/mL 的木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，備用。

產(chǎn)品說明：
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產(chǎn)生，能催化水解木聚糖，也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶，可分解釀造或飼料工業(yè)中的原料細(xì)胞壁以及β-葡聚糖，降低釀造中物料的粘度，促進有效物質(zhì)的釋放，以及降低飼料中的非淀粉多糖，促進營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，因而廣泛的應(yīng)用于釀造和飼料工業(yè)中，中性木聚糖酶(NEX)一般分離自最適生長pH 為6-8 的微生物。

NEX 在中性環(huán)境中催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，在沸水浴條件下進一步與3,5-二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應(yīng)，在540nm 處有特征吸收峰，反應(yīng)液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比，通過測定反應(yīng)液在540nm 吸光值增加速率，可計算NEX 活力。

試驗中所需的儀器和試劑：
低溫離心機、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、微量玻璃比色皿/96 孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

操作步驟：
一、粗酶液提?。?/span>
1、細(xì)胞或微生物樣品發(fā)酵液的制備：
發(fā)酵液于8000rpm，4℃，離心15min，取上清，置于冰上待測。
2、組織：
稱取約0.1g 組織，加入1mL 緩沖液，冰上充分研磨。8000g，4℃離心15min，取上清，置冰上待測。
3、酶干粉：
稱約1mg，加緩沖液1mL，震蕩充分溶解。
二、測定步驟：
1、可見分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長至540nm，蒸餾水調(diào)零。
2、將上清液/酶溶液用蒸餾水稀釋十倍后置冰上待測。
3、操作表：
加入試劑        對照管     測定管       標(biāo)準(zhǔn)管       空白管
樣品（μL）        50         50           -            -
標(biāo)準(zhǔn)品（μL）      -           -           50           -
蒸餾水（μL）      -           -           -            50
緩沖液（μL）      75         75           75           75
試劑一（μL）      -          50           50           50
混勻，蓋緊瓶蓋，50℃水浴，反應(yīng)30min，立即沸水浴10min 滅活。(注意不要讓蓋子爆開，以免進水，改變了反應(yīng)體系)
試劑一（μL）      50          -            -             -
試劑二（μL）      75          75           75            75
混勻，沸水浴顯色5min(注意不要讓蓋子爆開，以免進水改變了反應(yīng)體系)，冰浴冷卻后吸取200μL 至96 孔板/比色皿中，盡快測量540nm 波長下的吸光值A(chǔ) 對照管、A 測定管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A 空白管，計算ΔA 測定=A 測定管-A 對照管，ΔA 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管。

三、NEX 計算公式
1. 發(fā)酵液NEX 活力計算：
酶活定義：50℃，pH 6.0 條件下每毫升發(fā)酵液每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1μmol 還原糖所需的酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。
NEX 活力（U/mL）=[ΔA 測定÷(ΔA 標(biāo)準(zhǔn)÷C 標(biāo)準(zhǔn)) ]÷T=0.13×ΔA 測定÷ΔA 標(biāo)準(zhǔn)
2. 酶干粉NEX 活力計算：
酶活定義：50℃，pH 6.0 條件下，每毫克酶每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1μmol 還原糖所需的酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。
NEX 活力（U/mg）=[ΔA 測定÷(ΔA 標(biāo)準(zhǔn)÷C 標(biāo)準(zhǔn)) ] ×V 樣品×10÷(V 樣品×W 酶÷V 提取)÷T=1.33×ΔA 測定÷ΔA 標(biāo)準(zhǔn)÷W 酶。
3. 組織中NEX 活力的計算:
（1）按樣品蛋白濃度計算：
酶活定義：50℃，pH 6.0 條件下，每mg 組織蛋白每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1μmol 還原糖所需的
酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。
NEX 活力（U/mg prot）=[ΔA 測定÷(ΔA 標(biāo)準(zhǔn)÷C 標(biāo)準(zhǔn)) ] ×V 樣品×10÷(V 樣品×Cpr)÷T=1.33×ΔA 測定÷ΔA 標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr。
（2）按樣品鮮重計算：
酶活定義：50℃，pH 6.0 條件下，每g 組織每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1μmol 還原糖所需的酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。
NEX 活力（U/g 鮮重）=[ΔA 測定÷(ΔA 標(biāo)準(zhǔn)÷C 標(biāo)準(zhǔn)) ] ×V 樣品×10÷(V 樣品×W÷V 提取) ÷T=1.33×ΔA 測定÷ΔA 標(biāo)準(zhǔn)÷W。

C 標(biāo)準(zhǔn)：木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，4μmol/mL；
V 樣品：加入的樣品體積，0.05mL；
W 酶：酶干粉的質(zhì)量，mg；
T：反應(yīng)時間，30min；
Cpr：樣品蛋白濃度，mg/mL；
W：組織樣品鮮重，g；
V 提取：提取液體積，1mL；
10：樣品稀釋倍數(shù)。

注意事項：
1. 吸光度變化應(yīng)該控制在0.01~1.5 之間，否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計算公式中參與計算的稀釋倍數(shù)要相應(yīng)改變；也可以延長或者縮短反應(yīng)時間。
2. 試劑盒2-8℃保存，保質(zhì)期3 個月，建議盡快使用。