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堿性木聚糖酶（BAX）活性檢測試劑盒說明書
微量法

產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓
產(chǎn)品商標：solarbio
貨號：BC3615
規(guī)格：100T/48S
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            
參考價格：860
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨
關(guān)鍵詞：堿性木聚糖酶活性檢測|木聚糖酶活性檢測|木聚糖酶活性|木聚糖
產(chǎn)品內(nèi)容：
緩沖液：液體60mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體7mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體10mL×1 瓶，4℃避光保存。
標準品：粉劑×1 支，4℃保存。10mg 木糖。臨用前加入667μL 蒸餾水配制成100μmol/mL 的木糖標準液。再稀釋50 倍即2μmol/mL 的木糖標準溶液備用。

產(chǎn)品說明：
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產(chǎn)生，能催化水解木聚糖，也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶，可分解釀造或飼料工業(yè)中的原料細胞壁以及β-葡聚糖，降低釀造中物料的粘度，促進有效物質(zhì)的釋放，以及降低飼料中的非淀粉多糖，促進營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，因而廣泛的應(yīng)用于釀造和飼料工業(yè)中，堿性木聚糖酶（BAX）一般分離自最適生長pH 為9-11 的微生物。
BAX 在堿性環(huán)境中催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，在沸水浴條件下進一步與3,5-二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應(yīng)，在540nm 處有特征吸收峰，反應(yīng)液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比，通過測定反應(yīng)液在540nm 吸光值增加速率，可計算BAX 活力。

需自備的儀器和用品：
天平、低溫離心機、恒溫水浴鍋，可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96 孔板和蒸餾水。

操作步驟：
一、粗酶液提取
1. 發(fā)酵液：發(fā)酵液于8000rpm，4℃，離心15min，取上清，作為待測樣品。
2. 酶干粉：稱約1mg，加1mL 緩沖液溶解，8000rpm，4℃，離心15min，取上清蒸餾水稀釋10 倍待測。。
3. 組織樣品：稱約0.1g 組織，加入1mL 緩沖液，冰上充分研磨。8000rpm，4℃，離心15min，取上清蒸餾水稀釋10 倍待測。
二、測定步驟
1、可見分光光度計/酶標儀預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長至540nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定（在EP 管中加入下列試劑）
試劑名稱（μL） 對照管測定管空白管標準管
樣品（μL） 60 60 - -
2μmoL/mL 木糖標準品- - - 60
蒸餾水- - 60 -
緩沖液（μL） 90 90 90 90
試劑一（μL） - 60 60 60
混勻，50℃水浴中反應(yīng)30min，立即沸水浴中10min 滅活。(注意不要讓蓋子爆開，以免進水，改變了反應(yīng)體系)
試劑一（μL） 60 - - -
試劑二（μL） 90 90 90 90
混勻，沸水浴中顯色5min(注意不要讓蓋子爆開，以免進水改變了反應(yīng)體系)，冷卻后吸取200μL 于96 孔板或比色皿中，盡快測定各管540nm 下的吸光度，分別記為A 測定、A 對照、A 標準、A 空白。

三、BAX 活性計算：
1. 發(fā)酵液BAX 活力計算：
酶活定義：50℃，pH 9.0 條件下，每毫升發(fā)酵液每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1μmol 還原糖所需的酶量為一個堿性木聚糖酶的活力單位。
BAX 活力（U/mL）=C 標準×（A 測定-A 對照）÷（A 標準-A 空白）÷T=0.067×（A 測定-A 對照）÷（A 標準-A 空白）

C 標準：木糖標準溶液濃度，2μmoL/mL；
T：反應(yīng)時間，30min。
2. 酶干粉BAX 活力計算：
酶活定義：50℃，pH 9.0 條件下，每毫克酶每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1μmol 還原糖所需的酶量為一個堿性木聚糖酶的活力單位。
BAX 活力（U/mg）= 10×C 標準×（A 測定-A 對照）÷（A 標準-A 空白）×V 提取÷W1÷T=0.67×（A 測定-A 對照）÷（A 標準-A 空白）÷W1
10：樣本稀釋倍數(shù)，10 倍；
C 標準：木糖標準溶液濃度，2μmoL/mL；
V 提取：加入緩沖液體積，1mL；
W1：酶干粉重量，mg；
T：反應(yīng)時間，30min。

3. 組織中BAX 活力計算：
酶活定義：50 ℃，pH 9.0 條件下，每mg 組織蛋白每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1μmol 還原糖所需的酶量為一個堿性木聚糖酶的活力單位。
ACX 活力（U/mg prot）= 10×C 標準×（A 測定-A 對照）÷（A 標準-A 空白）×V 樣品÷（V 樣品×Cpr）÷T=0.67×ΔA 測定÷ΔA 標準÷Cpr。

（2）按樣品鮮重計算：
酶活定義：50℃，pH 9.0 條件下，每克組織每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1μmol 還原糖所需的酶量為一個堿性木聚糖酶的活力單位。
BAX 活力（U/mg）= 10×C 標準×（A 測定-A 對照）÷（A 標準-A 空白）×V 提取÷W2÷T=0.67×（A 測定-A 對照）÷（A 標準-A 空白）÷W2

10：樣本稀釋倍數(shù)，10 倍；
C 標準：木糖標準溶液濃度，2μmoL/mL；
V 提?。杭尤刖彌_液體積，1mL；
W2：樣本鮮重，g；
T：反應(yīng)時間，30min；
Cpr：樣品蛋白濃度，mg/mL；
V 樣品：加入的樣品體積，0.06mL。

注意事項：
1. 吸光度變化應(yīng)該控制在0.01~1.2 之間，否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計算公式中參與計算的稀釋倍數(shù)要相應(yīng)改變。
2. 試劑盒2-8℃保存，保質(zhì)期3 個月，建議盡快使用。