產(chǎn)品名稱: 乙酸激酶(ACK)活性檢測試劑盒

產(chǎn)品英文名: Acetokinase（ACK)Assay Kit

產(chǎn)品貨號：BC3170      產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓

產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣      產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：1700
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字:   乙酸激酶檢測試劑盒|ACK檢測試劑盒|乙酸激酶|試劑盒

簡要介紹：
ACK廣泛存在于生物體內(nèi)，催化乙酸和ATP生成乙酰磷酸和ADP，是細菌碳代謝和能量代謝的關(guān)鍵酶，尤其是在古細菌甲烷合成代謝中起著中樞作用。
測定原理如下：（1）ACK催化乙酸鈉和ATP生成乙酰磷酸和ADP，（2）丙tong酸激酶催化ADP和PEP生成ATP和丙tong酸，（3）乳酸脫氫酶催化丙tong酸和NADH生成乳酸和NAD+，（4）在340nm下測定NADH氧化生成NAD+速率，即可反映ACK活性。

產(chǎn)品詳細描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體30mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前每瓶加入4mL雙蒸水，充分溶解待用。用不完的試劑仍4℃保存；
試劑三：粉劑×2瓶，-20℃保存；臨用前每瓶加入3mL雙蒸水，充分溶解待用；用不完的試劑-20℃保存；
試劑四：粉劑×2瓶，-20℃保存；臨用前每瓶加入2mL雙蒸水，充分溶解待用；用不完的試劑-20℃保存；
試劑五：粉劑×1支，-20℃保存；臨用前每支加入1mL雙蒸水，充分溶解待用；用不完的試劑-20℃保存；
試劑六：液體43μL×2支，4℃保存；臨用前每支加入457μL雙蒸水，充分溶解待用；用不完的試劑4℃保存；
試劑七：液體50μL×2支，-20℃保存；臨用前每支加入450μL雙蒸水，充分溶解待用；用不完的試劑仍4℃保存；
試劑八：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入5mL雙蒸水，充分溶解待用。用不完的試劑仍4℃保存。
工作液：吸取0.3mL 試劑二、1mL試劑三、0.65mL試劑四、0.2mL試劑五、0.2mL試劑六、0.2mL試劑七、1mL試劑八混勻，也可根據(jù)比例現(xiàn)用現(xiàn)配。于冰上備用。
產(chǎn)品說明：
ACK廣泛存在于生物體內(nèi)，催化乙酸和ATP生成乙酰磷酸和ADP，是細菌碳代謝和能量代謝的關(guān)鍵酶，尤其是在古細菌甲烷合成代謝中起著中樞作用。
測定原理如下：（1）ACK催化乙酸鈉和ATP生成乙酰磷酸和ADP，（2）丙tong酸激酶催化ADP和PEP生成ATP和丙tong酸，（3）乳酸脫氫酶催化丙tong酸和NADH生成乳酸和NAD+，（4）在340nm下測定NADH氧化生成NAD+速率，即可反映ACK活性。
自備實驗用品及儀器
  臺式離心機、紫外分光光度計、水浴鍋、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰、蒸餾水。

操作步驟：
一、樣品前處理：
1、細菌或細胞處理：
收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每500萬細菌或細胞加入1mL提取液，超聲波破碎細菌或細胞（功率20％，超聲3秒，間隔10秒，重復(fù)30次），15000g，4℃，離心20分鐘，取上清，置冰上待測。
2、組織處理：
稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進行冰浴勻漿；15000g ，4℃，離心20分鐘，取上清，置冰上待測
3、血清（漿）：直接檢測。
二、測定步驟

1. 紫外分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 將試劑一于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）保溫15min。

3. 操作表：

將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中，加樣本的同時開始計時，在340nm波長下記錄20秒時的初始吸光度A1，比色后迅速將比色皿連同反應(yīng)液一起放入37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴中準(zhǔn)確反應(yīng)3分鐘；迅速取出比色皿并擦干，340 nm下比色，記錄3分20秒時的吸光度A2，計算ΔA測定=A測定1-A測定2，ΔA空白=A空白1-A空白2，計算ΔA=ΔA測定-ΔA空白。
三、ACK活性計算：

1. 組織中ACK活力的計算:

（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
ACK（U/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(Cpr×V樣) ÷T=536×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
ACK（U/g 鮮重）= [ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V樣÷V提取×W) ÷T=536×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
ACK（U/10⁴ cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V樣÷V樣總×500) ÷T=1.072×ΔA
（4）按血清體積計算：
單位的定義：每mL血清（漿）中消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
ACK（U/mL）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷V樣 ÷T=536×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.001L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×10³ L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；          V樣：加入樣本體積，0.1 mL；V提取：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，3 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬。
注意事項：
1、測定過程中樣本和所有試劑在冰上放置，以免變性和失活。
2、比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃或25℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃或25℃蒸餾水，將此燒杯放入37℃或25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。
3、吸光值大于1時，建議稀釋后測量，注意計算公式乘以稀釋倍數(shù)；吸光值小于0.01時，建議延長反應(yīng)時間測量，注意計算公式變化。