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| 產(chǎn)地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號 | BC3245 |
| 用途 | |
| 英文名稱 | Mitochondrial respiratory chain complex III activity assay kit |
| 包裝規(guī)格 | |
| 純度 | % |
| CAS編號 | |
| 保質(zhì)期 | 1年 |
| 是否進(jìn)口 |
產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體100mL×1 瓶，-20℃保存；
試劑二：液體20mL×1 瓶，-20℃保存；
試劑三：液體1.5mL×1 支，-20℃保存；
試劑四：液體20mL×1 瓶，4℃保存；
試劑五：粉劑×1 支，-20℃保存；
試劑六：液體2.5mL×1 瓶，-20℃保存；
產(chǎn)品說明：
線粒體復(fù)合體Ⅲ（EC 1.10.2.2）又稱CoQ-細(xì)胞色素C 還原酶，廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中，是線粒體呼吸電子傳遞鏈主路和支路的共有成分，負(fù)責(zé)把還原型CoQ 的氫傳遞給細(xì)胞色素C，生成還原型細(xì)胞色素C。
與氧化型細(xì)胞色素C 不同，還原型細(xì)胞色素C 在550nm 有特征光吸收，因此550nm 光吸收增加速率能夠反映線粒體復(fù)合體Ⅲ酶活性。
試驗中所需的儀器和試劑：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本的前處理：
組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
準(zhǔn)確稱取0.1g 組織或收集500 萬細(xì)胞，加入1mL 試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
將勻漿600g， 4℃離心5min。
棄沉淀，將上清液轉(zhuǎn)移至另一離心管中，11000g 4℃離心10min。
上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白，可用于測定從線粒體泄露的復(fù)合體Ⅲ（此步可選做）。
步驟（4）中的沉淀即為線粒體，加入200uL 試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20%或200W，超聲3 秒，間歇10 秒，重復(fù)30 次），用于復(fù)合體Ⅲ酶活性測定。
二、測定步驟：
分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長至550nm，蒸餾水調(diào)零。
樣本測定
工作液的配制：臨用前把試劑五轉(zhuǎn)移到試劑四中混合溶解，置于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）孵育5min；用不完的試劑4℃可保存一周；
（2）在微量石英比色皿或96 孔板中加入10μL 樣本、25μL 試劑六和200μL 工作液，立即混勻，記錄550nm 處初始吸光值A1 和 2min 后的吸光值A2，計算ΔA=A2-A1。
三、復(fù)合體Ⅲ 活力單位的計算：
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下：
（1） 按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol 還原型細(xì)胞色素C 定義為一個酶活力單位。
復(fù)合體Ⅲ活力(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V 樣) ÷T
=615×ΔA÷Cpr
此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度。
（2） 按樣本鮮重計算
單位的定義：每g 組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 還原型細(xì)胞色素C 定義為一個酶活力單位。
復(fù)合體Ⅲ 活力(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T
=124×ΔA÷W
（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算
單位的定義：每1 萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 還原型細(xì)胞色素C 定義為一個酶活力單位。
復(fù)合體Ⅲ活力(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T
=0.248×ΔA
V 反總：反應(yīng)體系總體積，2.35×10-4 L；ε：細(xì)胞色素C 摩爾消光系數(shù)，1.91×104 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.01 mL；V 樣總：加入提取液體積，0.202 mL；T：反應(yīng)時間，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL； W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬。
b.使用96孔板測定的計算公式如下：
（1） 按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol 還原型細(xì)胞色素C 定義為一個酶活力單位。
復(fù)合體Ⅲ活力(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V 樣) ÷T
=1230×ΔA÷Cpr
此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度。
（2） 按樣本鮮重計算
單位的定義：每g 組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 還原型細(xì)胞色素C 定義為一個酶活力單位。
復(fù)合體Ⅲ 活力(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T
=248×ΔA÷W
（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算
單位的定義：每1 萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 還原型細(xì)胞色素C 定義為一個酶活力單位。
復(fù)合體Ⅲ活力(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T
=0.496×ΔA
V 反總：反應(yīng)體系總體積，2.35×10-4 L；ε：細(xì)胞色素C 摩爾消光系數(shù)，1.91×104 L / mol /cm；d：比色皿光徑，0.5cm；V 樣：加入樣本體積，0.01 mL；V 樣總：加入提取液體積，0.202 mL；T：反應(yīng)時間，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL； W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬。
相關(guān)文獻(xiàn)：
《Weanling Offspring of Dams Maintained on Serine-Deficient Diet Are Vulnerable to Oxidative Stress》 作者:Liuqin He, Haiwen Zhang, and Xihong Zhou 期刊:Oxidative Medicine and Cellular Longevity 影響因子:4.868 PMID:30305866
《A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum》 作者:Qiuli OuYang, Nengguo Tao* and Miaoling Zhang 期刊:Frontier in Immunology 影響因子:4.259 PMID:29503638
