產(chǎn)品名稱:：線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅳ活性檢測試劑盒 微量法

產(chǎn)品英文名:  Micro Mitochondrial Respiratory Chain ComplexⅣActivity Assay Kit

產(chǎn)品貨號：BC0945               產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓

產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣           產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價(jià)格：2800
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字：：   ：  ：  線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅳ檢測試劑盒|  線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅳ|線粒體呼吸鏈|試劑盒

簡要介紹：
線粒體復(fù)合體Ⅳ又稱細(xì)胞色素C 氧化酶，也是線粒體呼吸電子傳遞鏈主路和支路的共有成分，負(fù)責(zé)催化還原型細(xì)胞色素C 的氧化，并最終把電子傳遞給氧，生成水。
    還原型細(xì)胞色素C 在550nm 有特征光吸收，線粒體復(fù)合體Ⅳ催化還原型細(xì)胞色素C 生成氧化型細(xì)胞色素C，因此550nm 光吸收下降速率能夠反映線粒體復(fù)合體Ⅳ酶活性。

產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體75mL×2瓶，4℃保存；
試劑一：液體21mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1支，-20℃保存；
試劑三：粉劑×1支，4℃保存；
工作液的配制：臨用前取試劑一、試劑二、試劑三各一支，將試劑二和試劑三依次轉(zhuǎn)移到試劑一中混合溶解。
 
產(chǎn)品說明：
線粒體復(fù)合體Ⅳ又稱細(xì)胞色素C氧化酶，也是線粒體呼吸電子傳遞鏈主路和支路的共有成分，負(fù)責(zé)催化還原型細(xì)胞色素C的氧化，并最終把電子傳遞給氧生成水。還原型細(xì)胞色素C在550nm有特征光吸收，線粒體復(fù)合體Ⅳ催化還原型細(xì)胞色素C 生成氧化型細(xì)胞色素C，因此550nm光吸收下降速率能夠反映線粒體復(fù)合體Ⅳ酶活性。
試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

操作步驟：
一、復(fù)合體Ⅳ的提?。?/span>   

• 稱取約0.1g組織或收集500萬細(xì)胞，加入1.0 mL提取液，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

• 4 ℃ 600 g離心10min。

• 將上清液移至另一離心管中，4 ℃ 11000 g離心15min。

• 上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的復(fù)合體Ⅳ（此步可選做，可以判斷線粒體提取效果）。

• 在沉淀中加入400uL提取液，超聲波破碎（功率20％，超聲5秒，間隔10秒，重復(fù)15次），用于復(fù)合體Ⅳ酶活性測定，并且用于蛋白含量測定。

二、測定步驟：

1. 可見分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長至550nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 樣本測定

1. 將工作液置于37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）孵育15min；用不完的試劑4℃可保存一周；

2. 在1mL玻璃比色皿中分別加入

立即混勻，分別記錄測定管和空白管550nm處初始吸光值A1和1min后的吸光值A2，測定管的記為A1測定管，A2測定管，空白管的記為A1空白管，A2空白管。計(jì)算ΔA1=A1測定管-A2測定管，ΔA2=A1空白管-A2空白管，ΔA=ΔA1-ΔA2。
三、復(fù)合體Ⅳ活力單位的計(jì)算：

1. 按微量玻璃比色皿計(jì)算：

1. 按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化降解1nmol還原型細(xì)胞色素C定義為一個(gè)酶活力單位。
復(fù)合體Ⅳ活力(U/mg prot)=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1099×ΔA÷Cpr
V 反總：反應(yīng)體系總體積，2.1×10^-4 L；ε：細(xì)胞色素C 摩爾消光系數(shù)，1.91×10⁴ L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.01 mL； T：反應(yīng)時(shí)間，1 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL，需自行測定，建議使用本公司BCA蛋白濃度測定試劑盒。

2. 按微量玻璃比色皿計(jì)算：

將上述計(jì)算公式中的d-1cm改為d-0.6cm進(jìn)行計(jì)算即可。
注意事項(xiàng)：

1. 為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，需先取1-2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)，如果測定的吸光值過高（高于1），可用蒸餾水稀釋上清液后再測定。計(jì)算結(jié)果時(shí)注意乘以稀釋倍數(shù)。若ΔA大于0.4，需將樣本稀釋適當(dāng)倍數(shù)（計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)），使A1-A2 小于0.2，可提高檢測靈敏度；若ΔA偏小，則可以通過增加加入的樣品體積來提高靈敏度。

2. 由于提取液中含有蛋白，所以在測定樣品蛋白濃度時(shí)需要減去提取液本身的蛋白含量（單獨(dú)測量）。

3. 本試劑盒試劑足夠完成50管反應(yīng)。

4. 附：使用樣本重量計(jì)算公式：（檢測樣本數(shù)為50T/24S）

相關(guān)文獻(xiàn)：

《Elevated Serum Potassium Concentration Alleviates Cerebral Ischemia-Reperfusion Injury via Mitochondrial Preservation》 作者:Li N, Qin S, Xie L, Qin T, Yang Y,Fang W, Chen M 期刊:Cellular Physiology and Biochemistry  影響因子: PMID:30078008
《GSK3β-mediated tau hyperphosphorylation triggers diabetic retinal neurodegeneration by disrupting synaptic and mitochondrial functions》 作者:Huazhang Zhu, Weizhen Zhang, Yingying Zhao, Xingsheng Shu, Wencong Wang, Dandan Wang, Yangfan Yang, Zhijun He, Xiaomei Wang & Ying Ying  期刊:Molecular Neurodegeneration 影響因子:8.274 PMID:30466464
《A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum》 作者:Qiuli OuYang, Nengguo Tao* and Miaoling Zhang 期刊:Frontier in Immunology 影響因子:4.259 PMID:29503638