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| 產(chǎn)地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號 | BC1445 |
| 用途 | |
| 英文名稱 | Mitochondrial respiratory chain complex V activity detection kit |
| 包裝規(guī)格 | |
| 純度 | % |
| CAS編號 | |
| 保質(zhì)期 | 1年 |
| 是否進口 |
產(chǎn)品詳細描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體50mL×1瓶，4℃保存；
試劑二： 粉劑×1支，-20℃保存；臨用前每支加入1.11mL雙蒸水，充分溶解備用，分裝后-20℃保存，避免反復凍融；
試劑三：液體6mL×1瓶，4℃保存；
試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入3mL雙蒸水，充分混勻；
試劑五：粉劑×1瓶, 4℃保存；臨用前加入8mL雙蒸水，充分混勻；
試劑六：粉劑×1瓶, 4℃保存；臨用前加入8mL雙蒸水，充分混勻；
試劑七：液體8mL×1 瓶，室溫保存。
標準品：液體1mL×1 支，4℃保存。10μmol/mL磷標準液。臨用前用蒸餾水稀釋40倍即0.25μmol/mL 磷標準液。
定磷試劑的配制：按H2O：試劑五：試劑六：試劑七=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷試劑應為淺黃色。若無色則試劑失效，若是藍色則為磷污染（請根據(jù)需要，用*配*）。
注意：配試劑*用新的燒杯、玻璃棒和玻璃移液器，或者一次性塑料器皿，以避免磷污染。
產(chǎn)品說明：
線粒體復合體Ⅴ又稱F1F0-ATP合酶，廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體中，由F1和F0兩個亞單位組成。該酶利用呼吸鏈產(chǎn)生的質(zhì)子電化學梯度催化ATP合成，也可逆過程水解ATP。此外，復合體Ⅴ還存在于葉綠體、異養(yǎng)菌和光合細菌中。復合體Ⅴ是線粒體氧化磷酸化和葉綠體光合磷酸化合成ATP的關鍵酶。
復合體Ⅴ水解ATP產(chǎn)生ADP和Pi，通過測定Pi增加速率來測定復合體Ⅴ活性。
試驗中所需的儀器和試劑：
臺式離心機、可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、復合體Ⅴ的提?。?/span>
稱取約0.1g組織或收集500萬細胞，加入1.0 mL提取液，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
4 ℃ 600 g離心10min。
將上清液移至另一離心管中，4 ℃ 11000 g離心15min。
上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的復合體Ⅳ（此步可選做，可以判斷線粒體提取效果）。
在沉淀中加入400uL提取液，超聲波破碎（功率20％，超聲5秒，間隔10秒，重復15次），用于復合體Ⅳ酶活性測定，并且用于蛋白含量測定。
二、測定步驟：
可見分光光度計預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至660nm，蒸餾水調(diào)零。
操作表：
酶促反應
| 試劑名稱（μL） | 對照管 | 測定管 | 標準管 |
| 試劑二 | 10 | 10 | - |
| 試劑三 | 40 | 40 | - |
| 樣品 | - | 50 | - |
| 混勻， 37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）準確水浴30min | |||
| 試劑四 | 20 | 20 | - |
| 樣品 | 50 | - | |
| 混勻，8000rpm，室溫離心10min，取上清液 | |||
定磷
| 上清液 | 40 | 40 | 40 |
| 定磷試劑 | 200 | 200 | 200 |
混勻，40℃水浴10min，盡快在660nm測定吸光值，分別記為A測定管、A對照管、A標準管，計算ΔA=A測定管-A對照管。
注意事項：
為保證實驗結果的準確性，需先取1-2個樣做預實驗，如果測定的吸光值過高（高于1），可用蒸餾水稀釋上清液后再測定。計算結果時注意乘以稀釋倍數(shù)。若ΔA大于0.4，需將樣本稀釋適當倍數(shù)（計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù)），使A1-A2 小于0.2，可提高檢測靈敏度；若ΔA偏小，則可以通過增加加入的樣品體積來提高靈敏度。
由于提取液中含有蛋白，所以在測定樣品蛋白濃度時需要減去提取液本身的蛋白含量（單獨測量）。
本試劑盒試劑足夠完成50管反應。
附：使用樣本重量計算公式：（檢測樣本數(shù)為50T/24S）
相關文獻：
《A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum》 作者:Qiuli OuYang, Nengguo Tao* and Miaoling Zhang 期刊:Frontier in Immunology 影響因子:4.259 PMID:29503638
