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土壤谷氨酰胺酶(S-GLS) 活性檢測(cè)試劑盒說明書
可見分光光度法

產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓
英文名稱：Soil glutaminase (S-GLS) activity assay kit
產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
注意：正式測(cè)定之前選擇2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
貨號(hào)：BC3970
規(guī)格：50T/24S
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存；            
參考價(jià)格：600
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨
關(guān)鍵詞：土壤谷氨酰胺酶|土壤谷氨酰胺酶活性檢測(cè)|S-GLS|S-GLS活性檢測(cè)
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體30 mL×1 瓶，4 ℃保存；
試劑二：液體20 mL×1 瓶，4 ℃保存；
試劑三：液體5 mL×1 瓶，4℃保存；
試劑四：液體8 mL×1 瓶，常溫保存；
標(biāo)準(zhǔn)品：液體1mL×1 支，100μmol/mLNH4+，4℃保存。

產(chǎn)品說明：
S-GLS（EC3.5.1.2）存在于某些細(xì)菌以及植物根中，催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨，在氮素代謝中具有重要調(diào)控作用，尤其是調(diào)節(jié)游離氨含量和尿素代謝。
S-GLS 催化谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨，利用奈氏試劑檢測(cè)氨增加的速率，即可計(jì)算其酶活性。

試驗(yàn)需自備儀器和用品：
臺(tái)式離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、50 目篩（或更?。⒓妆?、冰和雙蒸水。

操作步驟：
一、樣品前處理：
新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干，過30~50 目篩。
二、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：
取100μL 標(biāo)準(zhǔn)液加入900μL 蒸餾水中，制備10μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后稀釋成0.4、0.2、0.1、0.05、0.025μmol/mL 的標(biāo)準(zhǔn)液。
三、測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至420nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣品測(cè)定（在EP 管中加入下列試劑）
試劑名稱         測(cè)定管          對(duì)照管           標(biāo)準(zhǔn)管               空白管
土樣（g）         0.1              0.1               -                    -
試劑一（μL）      550             550               -                    -
甲苯（μL）         10              10               -                    -
                     混勻后測(cè)定管常溫靜置10min，對(duì)照管沸水浴10min。
試劑二（μL）      400               -               -                    -
                          混勻，37℃水浴1 小時(shí)。
試劑二（μL）       -                400              -                    -
             充分混勻后沸水浴10min，8000 g 常溫離心10 min；取上清液65μL 與585μL 蒸餾水混勻即將上清液稀釋10 倍，在EP 管中加入下列試劑
稀釋上清液          650             650              -                   -
標(biāo)準(zhǔn)液               -                -            650                    -
試劑三              50               50            50                    50
試劑四              100              100          100                   100
蒸餾水              200             200           200                   850
         混勻，420nm 處讀取吸光值A(chǔ)，盡快測(cè)完。分別記為A 測(cè)定管，A 對(duì)照管，A 標(biāo)準(zhǔn)管，A 空白管。計(jì)算ΔA 測(cè)定=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管，ΔA 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管。

四、酶活性計(jì)算
1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
以ΔA 標(biāo)準(zhǔn)管為y 軸，標(biāo)準(zhǔn)液濃度為x 軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)方程為y=kx+b。將ΔA 測(cè)定帶入方程，得到x（μmol/mL）
2、土壤谷氨酰胺酶活性計(jì)算：
單位定義：37℃下每g 土壤每天催化谷氨酰胺生成1μmol 氨定義為一個(gè)酶活力單位。
S-GLS（U/g 鮮重）＝x×V 反總×10÷W ÷T=230.4×x÷W。

V 反總:0.96mL；
T：反應(yīng)時(shí)間，1/24d；
W：土壤質(zhì)量，g；
10：稀釋倍數(shù)。

注意事項(xiàng)：
1、當(dāng)測(cè)定吸光值大于1 時(shí)，建議將上清液進(jìn)一步稀釋后測(cè)量。
2、離心后若上清液仍含有少量雜質(zhì)，可將上清液再次8000g，常溫離心10min 去除。
3、若測(cè)定管顯色后有渾濁，可以將上清液稀釋后測(cè)量。