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| 產(chǎn)地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號(hào) | BC2230 |
| 用途 | |
| 英文名稱 | Lactic acid (LA) content detection kit |
| 包裝規(guī)格 | |
| 純度 | % |
| CAS編號(hào) | |
| 保質(zhì)期 | 1年 |
| 是否進(jìn)口 |
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液一：液體30mL×1瓶，4℃保存。
提取液二：液體4mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體20mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體67μL×1瓶，4℃保存。臨用前按試劑二（V）：蒸餾水（V）=10μL：450μL的比例配制試劑二溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。
試劑三：粉劑×1瓶，-20℃避光保存。臨用前加入12mL蒸餾水充分溶解。
試劑四：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加12mL蒸餾水充分溶解。
試劑五：粉劑×1瓶，-20℃避光保存。臨用前每瓶加入8mL 蒸餾水混勻，可分裝后-20℃保存，避免反復(fù)凍融。
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1支，4℃保存。臨用前加入1.04mL蒸餾水配成100μmol/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。
顯色液的配制：臨用前根據(jù)用量按照試劑三（V）：試劑四（V）=1：1的比例充分混勻，現(xiàn)配現(xiàn)用。
產(chǎn)品說明：
乳酸是生物體代謝過程中重要的中間產(chǎn)物，與糖代謝、脂類代謝、蛋白質(zhì)代謝及細(xì)胞內(nèi)能量代謝密切相關(guān)，乳酸含量是評(píng)估糖元代謝的和有氧代謝的重要指標(biāo)。乳酸在乳酸脫氫酶的作用下生成丙tong酸，同時(shí)使NAD+還原生成NADH和H+，H+傳遞給PMS生成的PMSH2還原MTT生成紫色物質(zhì)，在570nm處有特征吸收峰。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、研缽/勻漿器、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋、乙醇和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理：
1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液一）加入提取液一，冰浴勻漿后于4℃，12000g離心10min，取0.8mL上清液，再加入0.12mL提取液二，12000g離心10min后取上清待測(cè)。
2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；于4℃，12000g離心10min，取0.8mL上清液，再加入0.12mL提取液二，12000g離心10min后取上清待測(cè)。
3. 血清（漿）：取100μL血清（漿）加入1mL提取液一，12000g離心10min，取0.8mL上清液，再加入0.12mL提取液二，12000g離心10min后取上清待測(cè)。
二、測(cè)定操作
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min，波長(zhǎng)調(diào)至570nm，乙醇調(diào)零。
2、標(biāo)準(zhǔn)液的稀釋：將100μmol/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液用蒸餾水稀釋為1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625 μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液待測(cè)。
3、加樣表：
測(cè)定管 對(duì)照管 標(biāo)準(zhǔn)管 空白管
樣品（μL） 50 50 - -
標(biāo)準(zhǔn)品（μL） - - 50 -
蒸餾水（μL） - - - 50
試劑一（μL） 200 250 200 200
試劑二（μL） 50 - 50 50
顯色液（μL） 300 300 300 300
試劑五（μL） 100 100 100 100
在EP 管中充分混勻，于37℃水浴準(zhǔn)確反應(yīng)20min，于4℃，10000rpm 離心10min，去上清，留沉淀。
乙醇（μL） 1000 1000 1000 1000
充分溶解沉淀后，于570nm 處測(cè)定吸光值，分別記為A 測(cè)定管，A 對(duì)照管，A 標(biāo)準(zhǔn)管，A 空白管，計(jì)算ΔA 測(cè)定=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管；ΔA 標(biāo)準(zhǔn)= A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管。
三、乳酸含量的計(jì)算：
1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
以各標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為x軸，以其對(duì)應(yīng)的吸光值（ΔA標(biāo)準(zhǔn)）為y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程
y=kx+b，將ΔA測(cè)定帶入公式中得到x（μmol/mL）。
2、乳酸含量計(jì)算
（1） 按照蛋白含量計(jì)算
LA含量（μmol/mg prot）= x×V樣品÷（V樣品×Cpr）= x÷Cpr。
（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
LA含量（μmol/g 鮮重）= x×（V上清+V提取液二）÷ （W×V上清÷V提取液一）= 1.15×x÷W。
（3）按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
LA含量（μmol/104 cell）= x×（V上清+V提取液二）÷ （500×V上清÷V提取液一） = 0.0023×x。
（4）按照液體體積計(jì)算
LA含量（μmol/mL）= x×（V上清+V提取液二）÷ [V液體×V上清÷（V提取液一+V液體）]= 12.65×x。
V樣品：加入的樣品體積，0.05mL。：
W：樣本質(zhì)量，g；
Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL，蛋白濃度需自行測(cè)定；
V上清：提取時(shí)上清液體積，0.8mL；V提取液二：加入的提取液二體積，0.12mL；
V提取液一：加入的提取液一體積，1mL；
500：細(xì)胞數(shù)量，500萬個(gè)；
V液體：液體樣品體積，0.1mL。
注意事項(xiàng)：
1. 若測(cè)定吸光值超過1.2或ΔA大于0.8，請(qǐng)將樣品體積進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂尯笤龠M(jìn)行測(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
相關(guān)文獻(xiàn)：
《Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis》 作者:Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou, Shuiqing Liu, Maojia Zhao, Yilu Qin, Rui Chen, Yong Teng & Manran Liu 期刊:Cell Death and Disease 影響因子:5.959 PMID:30850587
《Wearable Carbon Nanotube-Based BioSensors on Gloves for Lactate》 作者:Xiaojin Luo, Weihua Shi , Haoming Yu , Zhaoyang Xie , Kunyi Li and Yue Cui 期刊:Sensors 影響因子:3.031 PMID:30314270
