單寧酶活性檢測試劑盒 紫外分光光度法
- 發(fā)布日期: 2019-05-22
- 更新日期: 2025-07-07
產品詳請
產地 |
北京
|
品牌 |
Solarbio
|
貨號 |
BC4070
|
保存條件 |
2-8℃保存
|
英文名稱 |
Tannin enzyme activity detection kit
|
CAS編號 |
|
保質期 |
1年
|
單寧酶活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
產地:北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓
英文名稱:Tannin enzyme activity detection kit
產品商標:solarbio
注意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
貨號:BC4070
規(guī)格:50T/24S
保存與運輸:4℃保存或-20℃保存;
參考價格:640
庫存狀態(tài):現貨
關鍵詞:單寧酶|單寧酶活性檢測|單寧酶活性測定
產品內容:
提取液:液體75mL×2瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加入3mL無水乙醇混勻溶解。
標準品:粉劑×1瓶,4℃保存。5mg 沒食子酸丙酯,臨用前加入1.178mL無水乙醇充分混勻溶解,配成20μmol/mL 的標準溶液。
產品說明:
單寧酶全稱是單寧酯酰水解酶(Tannase,EC 3.1.1.20),存在于富含單寧的植物,也廣泛存在于微生物中,可以水解酯鍵和縮酚羧鍵,生成沒食子酸和葡萄糖。
使用沒食子酸丙酯(PG)作為單寧酶酶促反應的底物,其在270nn下有特征吸收峰,根據其反應前后吸光度的變化來計算單寧酶活力。
自備實驗用品及儀器:
紫外分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、乙醇、冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、樣本處理:
(1)組織:稱取約0.1g組織,加入1mL提取液進行冰浴勻漿。10000rpm ,4℃離心10分鐘,取上清,置冰上待測。
(2)細胞或微生物樣品的制備:先收集細胞或微生物樣品到離心管內,棄上清,按照每500萬細胞或微生物加入1mL提取液,超聲波破碎細菌或細胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復30次)。10000rpm,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
二、測定步驟:
(1)紫外分光光度計預熱30min,波長調至270nm。蒸餾水調零。
(2)將20μmol/mL的標準溶液用提取液稀釋為0.05μmol/mL 的標準溶液,測定其在270nm下的吸光度,記為A標準。
(3)吸取0.1mL樣品于1.5mLEP管中作為對照管,沸水浴5min,冷卻至常溫。
(4)加樣表:在1.5mLEP管中分別加入
試劑名稱(μL) 測定管 對照管
提取液 850 850
試劑一 50 50
樣品 100 100(已滅活)
40℃水浴反應10min后馬上沸水浴5min,冷卻后常溫10000rpm離心10min,取上清。
上清液 50 50
提取液 950 950
充分混勻后測定270nm下的吸光度,分別記為A測定管、A對照管,計算ΔA=A對照管-A測定管。
三、單寧酶活力計算:
1、按蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg組織蛋白在反應體系中每分鐘減少1nmol PG的酶量定義為一個酶活性單位。
單寧酶(U/mg prot)=ΔA÷(A標準÷C標準)×1000×F×V酶促÷(V樣品×Cpr)÷T=1000×ΔA÷A標準÷Cpr
2、按樣本鮮重計算:
單位的定義:每g組織在反應體系中每分鐘減少1nmol PG的酶量定義為一個酶活性單位。
單寧酶(U/g 鮮重)=ΔA÷(A標準÷C標準)×1000×F×V酶促÷(V樣品×W÷V提?。耇=1000×ΔA÷A標準÷W
3、按細胞或微生物個數計算:
單位的定義:每104個細胞或微生物在反應體系中每分鐘減少1nmol PG的酶量定義為一個酶活性單位。
單寧酶(U/104 cell)=ΔA÷(A標準÷C標準)×1000×F×V酶促÷(V樣品×500÷V提?。耇=1000×ΔA÷A標準
C標 準 : 標 準 溶 液 的 濃 度 , 0.05μmol/mL;
F : 上 清 液 的 稀 釋 倍 數 , 上 述 反 應 體 系 中
F=1mL÷0.05mL=20;
1000:1μmol=1000nmol;
V樣品:加入的樣品體積,0.1mL;
V酶促:酶促反應總體積,1mL;
Cpr:樣品蛋白濃度,mg/mL;
W:樣品質量,g;
V提?。禾崛∫后w積,1mL;
500:500萬個細胞;
T:反應時間,10min。
注意事項:
1、如果A測定管大于1.5,可以適當加大稀釋倍數,保證總體積1mL不變,如20μL上清液和980μL試劑一(相當于F=1000/20=50)。