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酪氨酸酶活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法

產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓
英文名稱：Tyrosinase activity assay kit
產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
貨號：BC4050
規(guī)格：50T/48S
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            
參考價格：440
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨
關(guān)鍵詞:酪氨酸酶活性檢測|酪氨酸酶活性|酪氨酸酶
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑×3瓶，4℃保存。臨用前每瓶加入15mL提取液充分溶解待用?，F(xiàn)配現(xiàn)用。

產(chǎn)品說明：
酪氨酸酶（tyrosinase：EC1.14.18.1）是一種單酚單加氧酶，是具有雙功能的含銅糖蛋白，廣泛存在于植物、酵母和動物組織中。酪氨酸酶是生物體合成黑色素的關(guān)鍵酶，也是引起果蔬酶促褐變的主要因素，同時也對昆蟲的免疫及生長有重要影響酪氨酸酶催化L-多巴生成多巴色素，其在475nm下有特征吸收峰，進而測定出酪氨酸酶的活性。

自備實驗用品及儀器：
可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰、蒸餾水。

操作步驟：
一、樣本處理：
（1）組織：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進行冰浴勻漿。12000g，4℃離心20min，取上清，置冰上待測。
（2）細胞或微生物樣品的制備：先收集細胞或微生物樣品到離心管內(nèi)，棄上清，按照每500萬細胞或微生物加入1mL提取液，超聲波破碎細菌或細胞（功率20%，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）。12000g，4℃離心20min，取上清，置冰上待測。
（3）血清（漿）：直接檢測。

二、測定步驟：
（1）分光光度計預(yù)熱30min，波長調(diào)至475nm。蒸餾水調(diào)零。
（2）加樣表：
在1mL玻璃比色皿中分別加入
試劑名稱（μL） 測定管
試劑一900
樣品100
充分混勻后立即測定10s時在475nm下的吸光度，記為A1，之后迅速將其放入37℃（哺乳動物）或25℃（其他物種）水浴或培養(yǎng)箱中3min。然后迅速拿出擦凈后測定190s時的吸光度，記為A2。計算ΔA=A2-A1。

三、酪氨酸酶活力計算：
1、按蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化生成1nmol多巴色素的酶量定義為一個酶活性單位。
酪氨酸酶（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×V反總×109÷(V樣×Cpr)÷T =90.09×ΔA÷Cpr。
2、按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘催化生成1nmol多巴色素的酶量定義為一個酶活性單位。
酪氨酸酶（U/g 鮮重）=ΔA÷（ε×d）×V反總×109÷(W÷V提取×V樣)÷T =90.09×ΔA÷W。
3、按細胞或微生物個數(shù)計算：
單位的定義：每104個細胞或微生物每分鐘催化生成1nmol多巴色素的酶量定義為一個酶活性單位。
酪氨酸酶（U/104 cell）=ΔA÷（ε×d）×V反總×109÷(500÷V提取×V樣)÷T =0.18×ΔA。
4、按樣品體積計算：
單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘催化生成1nmol多巴色素的酶量定義為一個酶活性單位。
酪氨酸酶（U/mL）=ΔA÷（ε×d）×V反總×109÷V樣÷T =90.09×ΔA。

V反總：反應(yīng)總體積，10-3L；
ε：多巴色素的摩爾消光系數(shù)：3.7×104 L/mol/cm；
d：比色皿光徑，1cm；
109：1 mol=109 nmol；
V樣：加入的樣品體積，0.1mL；
Cpr：樣品蛋白濃度，mg/mL；
W：樣品質(zhì)量，g；
V提?。禾崛∫后w積，1mL；
500：500萬個細胞；
T：反應(yīng)時間，3min。

注意事項：
1、當(dāng)ΔA大于0.3時，建議將樣品用提取液稀釋后測量；ΔA過小時，建議增加酶促反應(yīng)時間（5min或10min）或增加加入的樣品體積來測定。
2、試劑一溶解后易氧化。溶解后盡快用完。