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酪氨酸解氨酶（TAL）活性檢測試劑盒說明書
微量法

產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓
英文名稱：Tyrosine ammonia lyase (TAL) activity detection kit
產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
貨號：BC4065
規(guī)格：100T/96S
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存；            
參考價格：1200
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨
關(guān)鍵詞：酪氨酸解氨酶|酪氨酸解氨酶活性檢測|酪氨酸解氨酶活性|TAL|TAL活性檢測

產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體20mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×2瓶，4℃保存。臨用前每瓶加入2.8mL雙蒸水和11μL濃鹽酸充分溶解待用?，F(xiàn)配現(xiàn)用。

產(chǎn)品說明：
酪氨酸解氨酶（TAL）廣泛存在于植物和微生物中，是苯丙氨酸次生代謝途徑的關(guān)鍵酶之一。TAL能夠躍過肉桂酸-4-羥基化酶（C4H）直接將酪氨酸轉(zhuǎn)化為香豆酸，香豆酸可進(jìn)一步生成白藜蘆醇、柚皮素等具有抗氧化、抗衰老作用的苯丙素類天然產(chǎn)物。
TAL能夠分解酪氨酸產(chǎn)生香豆酸，其在310nm下有吸收峰，根據(jù)吸光度的變化率可計(jì)算出TAL活性。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研缽/勻漿器、冰、濃鹽酸和蒸餾水。

操作步驟：
一、樣本處理：
（1）組織：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。12000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
（2）細(xì)胞或細(xì)菌：先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi)，棄上清，按照每500萬細(xì)胞或細(xì)菌加入1mL提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）。12000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

二、測定步驟：
（1）紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，波長調(diào)至310nm。蒸餾水調(diào)零。
（2）加樣表：在微量石英比色皿/96孔UV板中分別加入
試劑名稱（μL） 測定管
試劑一140
試劑二40
樣品20
充分混勻后立即測定10s時在310nm下的吸光度，記為A1，之后迅速將其放入37℃水浴或37℃培養(yǎng)箱中3min（若酶標(biāo)儀有控溫功能，將溫度調(diào)至37℃）。然后迅速拿出擦凈后測定190s時的吸光度，記為A2。計(jì)算ΔA=A2-A1。

三、TAL活力計(jì)算：
1、按微量石英比色皿計(jì)算：
（1） 按蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘在310nm下吸光值變化0.01定義為一個酶活性單位。
TAL（U/mg prot）=ΔA÷0.01×V反總÷(V樣×Cpr)÷T =333×ΔA÷Cpr。
（2） 按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘在310nm下吸光值變化0.01定義為一個酶活性單位。
TAL（U/g 鮮重）=ΔA÷0.01×V反總÷(W÷V提取×V樣)÷T =333×ΔA÷W。
（3） 按細(xì)胞或細(xì)菌個數(shù)計(jì)算：
單位的定義：每104個細(xì)胞或細(xì)菌在反應(yīng)體系中每分鐘在310nm下吸光度變化0.01定義為一個酶活性單位。
TSL（U/104 cell）=ΔA÷0.01×V反總÷(500÷V提取×V樣)÷T =0.667×ΔA。

V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；
V樣：加入的樣品體積，0.02mL；
Cpr：樣品蛋白濃度，mg/mL；
W：樣品質(zhì)量，g；
V提取：提取液體積，1mL；
500：500萬個細(xì)胞；
T：反應(yīng)時間，3min。

2、按96孔UV板計(jì)算：
（1） 按蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘在310nm下吸光值變化0.005定義為一個酶活性單位。
TAL（U/mg prot）=ΔA÷0.005×V反總÷(V樣×Cpr)÷T =667×ΔA÷Cpr。
（2） 按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘在310nm下吸光值變化0.005定義為一個酶活性單位。
TAL（U/g 鮮重）=ΔA÷0.005×V反總÷(W÷V提取×V樣)÷T =667×ΔA÷W。
（3） 按細(xì)胞或細(xì)菌個數(shù)計(jì)算：
單位的定義：每104個細(xì)胞或細(xì)菌在反應(yīng)體系中每分鐘在310nm下吸光度變化0.005定義為一個酶活性單位。
TAL（U/104 cell）=ΔA÷0.005×V反總÷(500÷V提取×V樣)÷T =1.334×ΔA。

V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；
V樣：加入的樣品體積，0.02mL；
Cpr：樣品蛋白濃度，mg/mL；
W：樣品質(zhì)量，g；
V提?。禾崛∫后w積，1mL；
500：500萬個細(xì)胞；
T：反應(yīng)時間，3min。

注意事項(xiàng)：
1、當(dāng)ΔA大于0.2或者A1大于1.5時，建議將樣品用蒸餾水稀釋后測量；ΔA過小時，建議增加酶促反應(yīng)時間（5min或10min）或增加加入的樣品體積來測定。