花青素還原酶（ANR）活性檢測試劑盒 微量法
- 發(fā)布日期： 2019-05-23
- 更新日期： 2025-07-07
產品詳請
| 產地 |
北京
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| 品牌 |
Solarbio
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| 貨號 |
BC4095
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| 保存條件 |
2-8℃保存
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| 英文名稱 |
Anthocyanin Reductase (ANR) Activity Assay Kit
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| CAS編號 |
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| 保質期 |
1年
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花青素還原酶（ANR）活性檢測試劑盒說明書
微量法
產地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓
英文名稱：Anthocyanin Reductase (ANR) Activity Assay Kit
產品商標：solarbio
注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
貨號：BC4095
規(guī)格：100T/48S
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；
參考價格：5600
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨
關鍵詞：花青素還原酶|花青素還原酶活性檢測|ANR|ANR活性檢測
產品內容：
提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存。臨用前搖晃均勻。
試劑一：液體25mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×2支，4℃保存。每支臨用前加入1mL蒸餾水備用。
試劑三：粉劑×1瓶，-20℃保存。臨用前加入1mL乙醇和1mL蒸餾水混勻溶解備用?？梢苑盅b后-20℃保存，避免反復凍融。
試劑四：液體1mL×1支，4℃保存。
產品說明：
花青素還原酶（ANR）是原花青素生物合成途徑中的關鍵酶，使花色素轉變?yōu)橄鄳捻樖近S烷-3-醇，在植物體內起著非常重要的調控作用。
ANR在NADPH作用下將氯化矢車菊素轉化為黃烷-3-醇和NADP，在340nm下測定NADPH的減少速率，即可反映ANR活性。
自備實驗用品及儀器：
紫外分光光度計/酶標儀、低溫離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研缽/勻漿器、乙醇、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理：
（1）組織：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進行冰浴勻漿。12000g 4℃離心15分鐘，取上清，置冰上待測。
（2）細胞或微生物樣品的制備：先收集細胞或微生物樣品到離心管內，棄上清，按照每500萬細胞或微生物加入1mL提取液，超聲波破碎細菌或細胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復30次）。12000g，4℃離心15min，取上清，置冰上待測。
二、測定步驟：
（1）紫外分光光度計/酶標儀預熱30min，波長調至340nm。蒸餾水調零。
（2）加樣表：
試劑名稱（μL） 測定管 對照管
試劑一 170 170
試劑二 10 10
試劑三 5 5
樣品 10 -
上述試劑混勻后37℃水浴反應30min。
試劑四 5 5
樣品 - 10
混勻后測量測定管和對照管在340nm下的吸光度，分別記為A測定管、A對照管，計算ΔA=A對照管-A測定管。
三、ANR活力計算：
1、按微量石英比色皿計算：
（1） 按蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白在反應體系中每分鐘減少1nmol NADPH的酶量定義為一個酶活性單位。
ANR（U/mg prot）=[ΔA÷(ε×d)×109×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T =107.18×ΔA÷Cpr。
（2） 按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織在反應體系中每分鐘減少1nmol NADPH的酶量定義為一個酶活性單位。
ANR（U/g 鮮重）=[ΔA÷(ε×d) ×109×V反總]÷(W÷V提取×V樣)÷T =107.18×ΔA÷W。
（3） 按細胞或微生物個數(shù)計算：
單位的定義：每104個細胞或微生物在反應體系中每分鐘減少1nmol NADPH的酶量定義為一個酶活性單位。
ANR（U/104 cell）=[ΔA÷(ε×d) ×109×V反總]÷(500÷V提取×V樣)÷T =0.2144×ΔA。
V反總：反應總體積，2×10-4L；
ε：NADPH的摩爾消光系數(shù)，6.22×103L/mol/cm；
d：比色皿光徑，1cm；
V樣：加入的樣品體積，0.01mL；
Cpr：樣品蛋白濃度，mg/mL；
W：樣品質量，g；
V提?。禾崛∫后w積，1mL；
500：500萬個細胞；
T：反應時間，30min。
2、按96孔UV板計算：
將上述公式中的d-1cm改為d-0.6cm（96孔UV板光徑）進行計算即可。
注意事項：
1、當ΔA大于0.4或者A對照管大于1（96孔UV板為ΔA大于0.2或者A對照管大于1）時，建議將反應混合液用試劑一稀釋更大倍數(shù)或者減少加入的樣品體積進行測定；ΔA過小時，可以增加酶促反應時間（45min或60min）或增加加入的樣品體積來測定。
2、加入試劑四后，請在15min內測定完成。
3、樣品蛋白濃度另行測定。
