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脲酶（UE）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法
英文名稱(chēng)：Urease (UE) activity detection kit
關(guān)鍵詞：脲酶|脲酶活性檢測(cè)|脲酶活性測(cè)定|UE|UE活性檢測(cè)
注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
貨號(hào)：BC4115
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存，臨用前加3mL蒸餾水充分溶解；
試劑二：液體10mL×1瓶，4℃避光保存；
試劑三 A 液：液體 0.4mL×1 支，4℃保存；
試劑三 B 液：液體 1.6mL×1 瓶，4℃保存；臨用前將 A 液倒入 B 液中混合，待用；
試劑四：液體 2mL×1 瓶，4℃保存；
標(biāo)準(zhǔn)品：液體 1mL×1 支，4℃保存。1mg/mL 氮標(biāo)準(zhǔn)液。
產(chǎn)品說(shuō)明：
脲酶（UE）廣泛分布于植物的種子中，也存在于動(dòng)物的血液和尿液中，某些微生物也能分泌脲
酶。UE能夠水解尿素產(chǎn)生氨和碳酸，對(duì)尿素轉(zhuǎn)化起關(guān)鍵作用。利用靛酚藍(lán)比色法測(cè)定脲酶水解尿素
產(chǎn)生的NH3-N來(lái)反應(yīng)UE活性。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、天平、研缽/勻漿器、低溫離心機(jī)、微量玻璃比色皿/96孔板、恒溫水
浴鍋。
操作步驟：
一、樣品處理
1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5-10 的比例（建議稱(chēng)取約0.1g，加入1mL提取液），
冰上勻漿后于4℃，12000g 離心15min，取上清待測(cè)。
2. 細(xì)胞/細(xì)菌：按照細(xì)胞/細(xì)菌數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500-1000：1 的比例（建議500
萬(wàn)個(gè)細(xì)胞加入1mL 提取液），冰浴超聲波破碎（功率300w，超聲3 s，間隔7 s，總時(shí)間3min）；
然后4℃，12000g 離心15min，取上清置于冰上待測(cè)。
3. 血清（漿）或其它液體：直接檢測(cè)。
二、測(cè)定操作：
1、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，波長(zhǎng)調(diào)至 630nm，可見(jiàn)分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。
2、將 1mg/mL 氮標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋至 2μg/mL 備用。
3、加樣表：
試劑名稱(chēng)（μL） 空白管 標(biāo)準(zhǔn)管 測(cè)定管 對(duì)照管
樣品                           20     20
蒸餾水           -                     40
試劑一           -        -     40      -
試劑二           -        -     80     80
充分混勻，于 37℃反應(yīng) 1h，于 EP 管中或者 96 孔板中加入下列溶液
反應(yīng)混合液       -        -     80     80
蒸餾水         80         -
標(biāo)準(zhǔn)液         -          80
試劑三         16         16     16    16
試劑四         12         12     12    12
混勻，室溫靜止 20min。
蒸餾水         92         92     92     92
充分混勻后測(cè)定 630nm 處吸光值，記為 A 空白管、A 標(biāo)準(zhǔn)管、A 測(cè)定管和 A 對(duì)照管。
計(jì)算?A 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管，?A 測(cè)定=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。
三、計(jì)算公式：
1、液體中UE活力的計(jì)算：
單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘產(chǎn)生1μg NH3-N定義為一個(gè)酶活力單位。
UE（U/mL）=?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)品×V酶促÷V樣÷T=0.233×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)。
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中UE活力的計(jì)算：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1μg NH3-N定義為一個(gè)酶活力單位。
UE活力（U/mg prot）=?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)品×V酶促÷(V樣×Cpr)÷T=0.233×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr。
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織每分鐘產(chǎn)生1μg NH3-N定義為一個(gè)酶活力單位。
UE活力（U/g鮮重）=?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)品×V酶促÷(W× V樣÷V提取)÷T=0.233×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷W。
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每1百萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1μg NH3-N定義為一個(gè)酶活力單位。
UE活力（U /106 cell）=?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)品×V酶促÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V提取) ÷T=0.233×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷細(xì)胞數(shù)量。
C標(biāo)準(zhǔn)液：標(biāo)準(zhǔn)液濃度，2 μg/mL；
T：反應(yīng)時(shí)間，60min；
V酶促：酶促反應(yīng)體系總體積，0.14mL；
V樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.02mL；
V提取：提取液體積，1mL；
Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；
W：樣本質(zhì)量，g；
細(xì)胞數(shù)量：以百萬(wàn)計(jì)。
注意事項(xiàng)：
1. ?A測(cè)定大于0.6時(shí)，建議將反應(yīng)混合液用蒸餾水稀釋或者樣品用蒸餾水稀釋后在進(jìn)行測(cè)定。