關(guān)鍵字：谷胱甘肽過氧化物酶| GPX活性檢測|試劑盒|微量法

簡要介紹：
GSH-Px催化H2O2氧化GSH，產(chǎn)生GSSG；谷胱甘肽還原酶（GR）催化NADPH還原GSSG，再生GSH，同時NADPH氧化生成NADP+；NADPH在340 nm有特征吸收峰，而NADP+沒有；通過測定340 nm光吸收減少速率來計算GSH-Px活性。GSH-Px是谷胱甘肽氧化還原循環(huán)中催化還原型谷胱甘肽（GSH）氧化的主要酶之一。GSH-Px不僅能夠特異地催化還原型谷胱甘肽與ROS反應(yīng)，生成氧化型谷胱甘肽GSSG，從而保護生物膜免受ROS的損害，維持細胞的正常功能。

產(chǎn)品詳細描述

商品貨號：	商品品牌：	規(guī)格	基本售價：	選擇規(guī)格
BC1195- 100管/96樣	Solarbio	100管/96樣	1900.00元

產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體×1 支，-20℃保存。
混合試劑配制：臨用前，在試劑二中加入試劑一20 mL，充分震蕩溶解后加入全部試劑三，混勻。（注意：必須 現(xiàn)配現(xiàn)用，當天使用完）
試劑四：液體×1 瓶，4℃保存。

產(chǎn)品說明： 
GSH-Px 是谷胱甘肽氧化還原循環(huán)中催化還原型谷胱甘肽（GSH）氧化的主要酶之一。GSH-Px不僅能夠特異 地催化還原型谷胱甘肽與ROS反應(yīng)，生成氧化型谷胱甘肽GSSG，從而保護生物膜免受ROS 的損害，維持細胞的 正常功能；而且具有保護*、提高機體免疫力、拮抗有害金屬離子對機體的傷害和增加機體抗輻射等能力。 GSH-Px 催化H2O2 氧化GSH，產(chǎn)生GSSG；谷胱甘肽還原酶（GR）催化NADPH 還原GSSG，再生GSH，同 時NADPH 氧化生成NADP+；NADPH 在340 nm 有特征吸收峰，而NADP+沒有；通過測定340 nm 光吸收減少速 率來計算GSH-Px 活性。
自備儀器和用品： 紫外分光光度計/酶標儀、低溫離心機、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

操作步驟： 
一、粗酶液提?。?/span>
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）:試劑一體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取0.1g 組織，加入1mL 試劑一）進行 冰浴勻漿。10000rpm，4℃離心10min，取上清置冰上待測。
2. 細菌、真菌：按照細胞數(shù)量10 4個：試劑一體積（ml）500~1000:1 的比例,建議500 萬細胞加入1mL 試劑一）， 冰浴超聲波破碎細胞（率300w，超聲3 s，間隔7s，總時間3min）然后10000rpm，4℃，離心10min，取上清置 冰上待測。
3. 血清等液體：直接測定。

二、測定操作:
1. 分光光度計預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長到 340 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 混合試劑在 25℃或者 37℃（哺乳動物）水浴中預(yù)熱 30min 以上。
3. 空白管：依次在 1mL 石英比色皿中加入 20μL 蒸餾水、160μL 預(yù)熱的混合試劑，20μL 試劑四，迅速混勻后于 340nm 處測定第 10 s 和第 190s 的吸光值，分別記為 A 空 1 和 A 空，△A 空白管= A 空 1﹣A 空 2。
4. 測定管：依次在 1mL 石英比色皿中加入 20μL 上清液、160μL 預(yù)熱的混合試劑，20μL 試劑四，迅速混勻后于 340nm 處測定第 10 s 和第 190s 的吸光值，分別記為 A 測 1 和 A 測 2，△A 測定管= A 測 1﹣A 測 2。
 注意：空白管只需測定一次。 
三、GSH-Px 活性計算：
A.使用微量石英比色皿測定：
(1). 按蛋白濃度計算
GSH-Px 活力單位定義：一定溫度中，每 mg 蛋白每分鐘催化 1nmol NADPH 氧化為 1 個酶活單位。
GSH-Px (U/mg prot)=[(△A 測定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×10 9]÷（ Cpr×V 樣）÷T =536×(△A 測定管-△A 空白管)÷Cpr
(2). 按樣本質(zhì)量計算
GSH-Px 活力單位定義：一定溫度中，每 g 樣本每分鐘催化 1nmol NADPH 氧化為 1 個酶活單位。
GSH-Px (U/g)=[(△A 測定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×10 9]÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T =536×(△A 測定管-△A 空白管)÷W
(3). 按細胞數(shù)量計算
GSH-Px 活力單位定義：一定溫度中，每 10 4個細胞每分鐘催化 1nmol NADPH 氧化為 1 個酶活單位。
GSH-Px (U/10 4 cell)=[(△A 測定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×10 9]÷（細胞數(shù)量×V 樣÷V 樣總）÷T =536×(△A 測定管-△A 空白管)÷細胞數(shù)量
(4). 按液體體積計算
GSH-Px 活力單位定義：一定溫度中，每毫升液體每分鐘催化 1nmol NADPH 氧化為 1 個酶活單位。
GSH-Px (U/ml)=[(△A 測定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×10 9]÷V 樣÷T =536×(△A 測定管-△A 空白管) ε:NADPH 摩爾消光系數(shù)6.22×10 3L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V 反總：反應(yīng)體系總體積，200μL=2×10 -4 L；10 6：1mol=1×10 6μmol； Cpr：上清液蛋白濃度（mg/mL）；V 樣：加入反應(yīng)體系中上清液體，20μL =0.02 mL； V 樣總：加入提取液體積，1mL；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，3min。

B.使用 96 孔板測定： 
(1). 按蛋白濃度計算
GSH-Px 活力單位定義：一定溫度中，每 mg 蛋白每分鐘催化 1nmol NADPH 氧化為 1 個酶活單位。
GSH-Px (U/mg prot)=[(△A 測定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×10 9]÷（ Cpr×V 樣）÷T =1027×(△A 測定管-△A 空白管)÷Cpr
(2). 按樣本質(zhì)量計算
GSH-Px 活力單位定義：一定溫度中，每 g 樣本每分鐘催化 1nmol NADPH 氧化為 1 個酶活單位。
GSH-Px (U/g)=[(△A 測定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×10 9]÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T =1027×(△A 測定管-△A 空白管)÷W
(3). 按細胞數(shù)量計算
GSH-Px 活力單位定義：一定溫度中，每 10 4個細胞每分鐘催化 1nmol NADPH 氧化為 1 個酶活單位。
GSH-Px (U/10 4 cell)=[(△A 測定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×10 9]÷（細胞數(shù)量×V 樣÷V 樣總）÷T =1027×(△A 測定管-△A 空白管)÷細胞數(shù)量
(4). 按液體體積計算
GSH-Px 活力單位定義：一定溫度中，每毫升液體每分鐘催化 1nmol NADPH 氧化為 1 個酶活單位。
GSH-Px (U/ml)=[(△A 測定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×10 9]÷V 樣÷T =1027×(△A 測定管-△A 空白管) ε:NADPH 摩爾消光系數(shù)6.22×10 3L/mol/cm；d：比色皿光徑，0.5cm；V 反總：反應(yīng)體系總體積，200μL=2×10 -4 L；10 6：1mol=1×10 6μmol； Cpr：上清液蛋白濃度（mg/mL）；V 樣：加入反應(yīng)體系中上清液體，20μL =0.02 mL； V 樣總：加入提取液體積，1mL；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，3min。
 注意事項： 
1. 樣品處理等過程均需要在冰上進行，且須在當日測定酶活力。
2. 混合試劑和底物液須臨用前配制，配完后置于冰上，當天使用完。
3. 測定過程操作須迅速。
4. 細胞中GSH-Px 活性測定時，細胞數(shù)目須在300 萬-500 萬之間，細胞中GSH-Px 的提取時可加試劑一后研磨 或超聲波處理，不能用細胞裂解液處理細胞。

相關(guān)文獻:

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《Toxic effect of microcystin-LR on blood vessel development》 作者:Qilong Wang, Guosheng Xiao, Guoliang Chen, Huihui Du, Linping Wang,Dongqin Guo & Tingzhang Hu 期刊:Toxicological & Environmental Chemistry 影響因子:3.547 PMID:28189720
《MicroRNA-98 reduces amyloid β-protein production and improves oxidative stress and mitochondrial dysfunction through the Notch signaling pathway via HEY2 in Alzheimer's disease mice》 作者:Fang?Zhou Chen Ying Zhao Hui?Zhao Chen 期刊:International Journal of Molecular Medicine 影響因子:2.928 PMID:30365070