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| 產(chǎn)地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號 | BC0980 |
| 用途 | 現(xiàn)詢客服 |
| 英文名稱 | 現(xiàn)詢客服 |
| 包裝規(guī)格 | 25管/24樣 |
| CAS編號 | |
| 別名 | 現(xiàn)詢客服 |
| 純度 | 現(xiàn)詢客服% |
| 分子式 | 現(xiàn)詢客服 |
| 是否進口 | 否 |
乙酰輔酶A含量檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
注意：正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。
貨號：BC0980
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×1 支，-20℃保存。臨用前加入 500μL 試劑五充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑三：液體 20μL×1 支，4℃保存。臨用前加入 500μL 試劑五充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑四：粉劑×1 瓶，-20℃保存。臨用前加入 45mL 試劑五充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑五：液體 60mL×1 瓶，4℃保存。
工作液的配制：臨用前請根據(jù)擬用工作液體積（樣本數(shù)×0.92 m L），將試劑二、三和四按照1:1:90的比例混合，或者直接把試劑二和試劑三加入到試劑四中混勻（可以測定48樣）；加樣前置37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴鍋中預(yù)熱30 min；現(xiàn)配現(xiàn)用；
產(chǎn)品說明：
乙酰輔酶 A 廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中。是生物體能源物質(zhì)代謝過程中產(chǎn)生的一種重要的中間代謝產(chǎn)物。在體內(nèi)能源物質(zhì)代謝中是一個樞紐性的物質(zhì)。糖、脂肪、蛋白質(zhì)三大營養(yǎng)物質(zhì)通過乙酰輔酶 A 匯聚成一條共同的代謝通路-三羧酸循環(huán)和氧化磷酸化，經(jīng)過這條通路徹底氧化生成二氧化碳和水，釋放能量用于 ATP 合成。此外，乙酰輔酶 A 是合成脂肪酸，酮體，膽固醇及其衍生物等生理活性物質(zhì)的前體物質(zhì)。蘋果酸脫氫酶可催化蘋果酸和 NAD 生成草酰乙酸和 NADH。檸檬酸合酶可催化乙酰輔酶 A 和草酰乙酸生成檸檬酸和輔酶 A。利用蘋果酸脫氫酶和檸檬酸合酶的偶聯(lián)反應(yīng)，乙酰輔酶 A 含量和NADH 的生成速率成正比，340nm 下吸光值的上升速率反應(yīng)了乙酰輔酶 A 含量的高低。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、乙酰輔酶A 的提取
1、細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：
試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 試劑一），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL試劑一），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
二、測定步驟
1、分光光度計預(yù)熱 30min，用蒸餾水于 340nm 處調(diào)零。
2、取 920μL 工作液和 100μL 樣本至 1mL 石英比色皿，混勻，立即記錄 340nm 處 20s 的吸光值 A1和 80s 時的吸光值 A2，計算?A=A2-A1。
三、乙酰輔酶 A 含量計算
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為 y = 1640x + 0.012；x 為吸光值，y 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（nmol/mL）。
注意：本試劑盒*檢測限為 1.6nmol/mL。
（1）按照蛋白濃度計算
乙酰輔酶 A 含量(nmol/mg prot)=[(1640×?A＋0.012) ×V1]÷(V1×Cpr)=(1640×?A＋0.012) ÷Cpr
需要另外測定，建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。
（2）按照樣本質(zhì)量計算
乙酰輔酶 A 含量(nmol/g 鮮重)=[(1640×?A＋0.012) ×V1]÷(W×V1÷V2)=(1640×?A＋0.012) ÷W
(3 ) 按照細菌或細胞密度計算：
乙酰輔酶 A 含量(nmol/104
)=[(1640×?A＋0.012)×V1]÷(500×V1÷V2)=(1640×?A＋0.012)÷500
V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.1mL；V2：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；
W：樣本質(zhì)量，g；500：細胞或細菌總數(shù)，500 萬。
相關(guān)文獻：
《Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis》 作者:Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou, Shuiqing Liu, Maojia Zhao, Yilu Qin, Rui Chen, Yong Teng & Manran Liu 期刊:Cell Death and Disease 影響因子:5.959 PMID:30850587
《Cancer-Associated Fibroblasts Accelerate Malignant Progression of Non-Small Cell Lung Cancer via Connexin 43-Formed Unidirectional Gap Junctional Intercellular Communication》 作者:Luo M,Luo Y, Mao N, Huang G, Teng C,Wang H, Wu J, Liao X, Yang J 期刊:Cellular Physiology and Biochemistry 影響因子: PMID:30453281
